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https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9992Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| judithmariadeoliveiraguimaraes.pdf | 1.55 MB | Adobe PDF |  View/Open |
| Type: | Dissertação |
| Title: | Síntese e caracterização de nanopartículas de quitosana para aplicação em transfecção celular |
| Author: | Guimarães, Judith Maria de Oliveira |
| First Advisor: | Camargo, Luiz Sérgio de Oliveira |
| Co-Advisor: | Munk, Michele |
| Referee Member: | Brandão, Humberto de Mello |
| Referee Member: | Maranduba, Carlos Magno da Costa |
| Referee Member: | Santos, Marcelo de Oliveira |
| Referee Member: | Almeida, Camila Guimarães |
| Resumo: | A abordagem da engenharia genética em animais envolve diversos tipos de tecnologias direcionadas para a produção de Animais Geneticamente Modificados (AGMs). Uma etapa essencial para a produção de AGM consiste no carreamento in vitro de material genético em células somáticas. Contudo, as técnicas desenvolvidas para o carreamento gênico não têm sido eficientes devido as falhas na transfecção e integração do transgene que estão relacionados a diversos fatores. Atualmente, novas alternativas surgiram para a entrega eficiente de DNA exógeno, como a utilização de nanocarreadores, devido sua capacidade de interação com material genético e internalização celular. O objetivo deste estudo é sintetizar e caracterizar nanopartículas (NPs) de quitosana visando aplicações em transfecção de células somáticas. A síntese da NP de quitosana foi realizada pelo método de gelificação iônica. O plasmídeo utilizado foi o PEF- GFP clonado na E. coli stbl3 e purificado seguindo o protocolo do kit QIAprep® Spin Maxprep. As NPd foram caracterizadas pela técnica de DLS que revelou uma variação de tamanhos de acordo com as proporções utilizadas desde nanopartículas com 117,7nm a 313,9nm. Dentre os tratamentos testados, optou-se pela proporção de 6/1/1 com NP livres variando o diâmetro médio de 124,7 a 142,7 nm para a realização dos ensaios de transfecção. O nanocomplexo contendo DNA plasmidial/TPP/NPs de quitosana apresentou diâmetro variando de 387,2nm e 284,4nm e o nanocomplexo DNA plasmidial/ NPs de quitosana apresentou diâmetro variando de 351,9nm e 369,7nm. Foram realizados vários ensaios de transfecção alterando produção de NPs com e sem TPP, tempo de exposição, pH, potencial Zeta e uso de meios DMEM ou PBS/SFS. O tratamento em que os nanocomplexos foram preparados com TPP, usando PBS/ SFB, pH 6,5 e as células HEK 293 ficaram expostas por 24 horas aos nanocomplexos apresentaram uma melhor eficiência de transfecção (8,25%) em relação aos outros tratamentos. Portanto, os resultados demonstraram que o pH e o tempo de exposição aos nanocomplexos influenciam na taxa de transfecção celular utilizando NP de quitosana. |
| Abstract: | The approach of genetic engineering in animals involves several types of technologies directed to the production of Genetically Modified Animals (AGMs). An essential step for the production of AGM is the in vitro transport of genetic material into somatic cells. However, the techniques developed for gene loading have not been efficient due to the failures in transfection and transgene integration that are related to several factors. Currently, new alternatives have emerged for the efficient delivery of exogenous DNA, such as the use of nanocarriers, due to their ability to interact with genetic material and cellular internalization. The aim of this study is to synthesize and characterize the of nanoparticles (NPs) of chitosan for transfection application. The synthesis of NP of chitosan was performed by the ionic gelation method. The plasmid used was PEF-GFP cloned in E. coli stbl3 and purified following the QIAprep® Spin Maxprep kit protocol. NPs were characterized by the DLS technique that revealed a variation of sizes according to the proportions used from nanoparticles with 117.7nm to 313.9nm. Among the treatments tested, the ratio of 6/1/1 with free NP varied from 124.7 to 142.7 nm for the transfection assays. The nanocomplex containing plasmid DNA / TPP / NPs of chitosan had a diameter varying from 387.2nm and 284.4nm and the nanocomplex DNA plasmid / chitosan NPs presented a diameter varying from 351,9nm and 369,7nm. Several transfection assays were performed altering production of NPs with and without TPP, exposure time, pH, Zeta potential and use of DMEM or PBS / SFS media. The treatment in which the nanocomplexes were prepared with TPP using PBS / SFB, pH 6.5 and the HEK 293 cells were exposed for 24 hours to the nanocomplexes showed a better transfection efficiency (8.25%) in relation to the other treatments. Therefore, the results demonstrated that the pH and time of exposure to the nanocomplexes influence the cellular transfection rate using chitosan NP. |
| Keywords: | Nanotecnologia Nanopartículas de quitosana Carreamento gênico Nanotechnology Chitosan nanoparticles Gene loading |
| CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA |
| Language: | por |
| Country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) |
| Institution Initials: | UFJF |
| Department: | ICB – Instituto de Ciências Biológicas |
| Program: | Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia |
| Access Type: | Acesso Aberto |
| URI: | https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9992 |
| Issue Date: | 11-Mar-2019 |
| Appears in Collections: | Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações) |
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