Please use this identifier to cite or link to this item: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9992
Files in This Item:
File Description SizeFormat 
judithmariadeoliveiraguimaraes.pdf1.55 MBAdobe PDFThumbnail
View/Open
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisor1Camargo, Luiz Sérgio de Oliveira-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.brpt_BR
dc.contributor.advisor-co1Munk, Michele-
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.brpt_BR
dc.contributor.referee1Brandão, Humberto de Mello-
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.brpt_BR
dc.contributor.referee2Maranduba, Carlos Magno da Costa-
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.brpt_BR
dc.contributor.referee3Santos, Marcelo de Oliveira-
dc.contributor.referee3Latteshttp://lattes.cnpq.brpt_BR
dc.contributor.referee4Almeida, Camila Guimarães-
dc.contributor.referee4Latteshttp://lattes.cnpq.brpt_BR
dc.creatorGuimarães, Judith Maria de Oliveira-
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.brpt_BR
dc.date.accessioned2019-05-09T15:57:42Z-
dc.date.available2019-05-08-
dc.date.available2019-05-09T15:57:42Z-
dc.date.issued2019-03-11-
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9992-
dc.description.abstractThe approach of genetic engineering in animals involves several types of technologies directed to the production of Genetically Modified Animals (AGMs). An essential step for the production of AGM is the in vitro transport of genetic material into somatic cells. However, the techniques developed for gene loading have not been efficient due to the failures in transfection and transgene integration that are related to several factors. Currently, new alternatives have emerged for the efficient delivery of exogenous DNA, such as the use of nanocarriers, due to their ability to interact with genetic material and cellular internalization. The aim of this study is to synthesize and characterize the of nanoparticles (NPs) of chitosan for transfection application. The synthesis of NP of chitosan was performed by the ionic gelation method. The plasmid used was PEF-GFP cloned in E. coli stbl3 and purified following the QIAprep® Spin Maxprep kit protocol. NPs were characterized by the DLS technique that revealed a variation of sizes according to the proportions used from nanoparticles with 117.7nm to 313.9nm. Among the treatments tested, the ratio of 6/1/1 with free NP varied from 124.7 to 142.7 nm for the transfection assays. The nanocomplex containing plasmid DNA / TPP / NPs of chitosan had a diameter varying from 387.2nm and 284.4nm and the nanocomplex DNA plasmid / chitosan NPs presented a diameter varying from 351,9nm and 369,7nm. Several transfection assays were performed altering production of NPs with and without TPP, exposure time, pH, Zeta potential and use of DMEM or PBS / SFS media. The treatment in which the nanocomplexes were prepared with TPP using PBS / SFB, pH 6.5 and the HEK 293 cells were exposed for 24 hours to the nanocomplexes showed a better transfection efficiency (8.25%) in relation to the other treatments. Therefore, the results demonstrated that the pH and time of exposure to the nanocomplexes influence the cellular transfection rate using chitosan NP.pt_BR
dc.description.resumoA abordagem da engenharia genética em animais envolve diversos tipos de tecnologias direcionadas para a produção de Animais Geneticamente Modificados (AGMs). Uma etapa essencial para a produção de AGM consiste no carreamento in vitro de material genético em células somáticas. Contudo, as técnicas desenvolvidas para o carreamento gênico não têm sido eficientes devido as falhas na transfecção e integração do transgene que estão relacionados a diversos fatores. Atualmente, novas alternativas surgiram para a entrega eficiente de DNA exógeno, como a utilização de nanocarreadores, devido sua capacidade de interação com material genético e internalização celular. O objetivo deste estudo é sintetizar e caracterizar nanopartículas (NPs) de quitosana visando aplicações em transfecção de células somáticas. A síntese da NP de quitosana foi realizada pelo método de gelificação iônica. O plasmídeo utilizado foi o PEF- GFP clonado na E. coli stbl3 e purificado seguindo o protocolo do kit QIAprep® Spin Maxprep. As NPd foram caracterizadas pela técnica de DLS que revelou uma variação de tamanhos de acordo com as proporções utilizadas desde nanopartículas com 117,7nm a 313,9nm. Dentre os tratamentos testados, optou-se pela proporção de 6/1/1 com NP livres variando o diâmetro médio de 124,7 a 142,7 nm para a realização dos ensaios de transfecção. O nanocomplexo contendo DNA plasmidial/TPP/NPs de quitosana apresentou diâmetro variando de 387,2nm e 284,4nm e o nanocomplexo DNA plasmidial/ NPs de quitosana apresentou diâmetro variando de 351,9nm e 369,7nm. Foram realizados vários ensaios de transfecção alterando produção de NPs com e sem TPP, tempo de exposição, pH, potencial Zeta e uso de meios DMEM ou PBS/SFS. O tratamento em que os nanocomplexos foram preparados com TPP, usando PBS/ SFB, pH 6,5 e as células HEK 293 ficaram expostas por 24 horas aos nanocomplexos apresentaram uma melhor eficiência de transfecção (8,25%) em relação aos outros tratamentos. Portanto, os resultados demonstraram que o pH e o tempo de exposição aos nanocomplexos influenciam na taxa de transfecção celular utilizando NP de quitosana.pt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)pt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentICB – Instituto de Ciências Biológicaspt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologiapt_BR
dc.publisher.initialsUFJFpt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectNanotecnologiapt_BR
dc.subjectNanopartículas de quitosanapt_BR
dc.subjectCarreamento gênicopt_BR
dc.subjectNanotechnologypt_BR
dc.subjectChitosan nanoparticlespt_BR
dc.subjectGene loadingpt_BR
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICApt_BR
dc.titleSíntese e caracterização de nanopartículas de quitosana para aplicação em transfecção celularpt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
Appears in Collections:Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações)



Items in DSpace are protected by Creative Commons licenses, with all rights reserved, unless otherwise indicated.