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Clase: Dissertação
Título : Perfil químico e potenciais antioxidante, antibacteriano e anti-inflamatório de extratos hidroetanólicos das folhas de Kalanchoe brasiliensis Cambess. (Crassulaceae)
Autor(es): Mayorga, Oscar Alejandro Santos
Orientador: Alves, Maria Silvana
Co-orientador: Sousa, Orlando Vieira de
Miembros Examinadores: Minatel, Elaine
Miembros Examinadores: Vilela, Fernanda Maria Pinto
Resumo: Kalanchoe brasiliensis Cambess. (Crassulaceae DC.) é uma planta nativa do Brasil, popularmente conhecida como saião e tradicionalmente usada no tratamento de doenças inflamatórias e infecciosas. Os principais metabólitos secundários presentes nesta espécie vegetal são as substâncias fenólicas, em particular os flavonoides. Com base nestes dados, o presente estudo teve como objetivo investigar a composição química e os potenciais antioxidante e antibacteriano in vitro e a atividade anti-inflamatória tópica in vivo de extratos hidroetanólicos das folhas de K. brasiliensis. Folhas frescas coletadas em janeiro (verão) e setembro (primavera) foram extraídas com soluções hidroetanólicas nas concentrações de 30% (EHJ30 e EHS30), 50% (EHJ50 e EHS50) e 70% (EHJ70 e EHS70) de etanol em água com auxílio de triturador mecânico. Estes extratos foram quimicamente caracterizados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a Detector de Arranjo de Diodo (CLAE-DAD). Os teores de fenóis e flavonoides totais foram determinados por espectrofotometria e a atividade antioxidante foi avaliada pelos métodos do sequestro do radical livre 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH•), redução da complexação do fosfomolibdênio e co-oxidação do sistema β-caroteno/ácido linoleico. A atividade antibacteriana foi determinada por meio da Concentração Inibitória Mínima (CIM) pelo método de microdiluição em caldo frente a oito cepas bacterianas de referência ATCC® e dez de rotina. Em seguida, procedeu-se ao estabelecimento da Concentração Bactericida Mínima (CBM) e à classificação do efeito antibacteriano bactericida ou bacteriostático. A atividade anti-inflamatória tópica foi avaliada usando modelos de edema de orelha induzidos por óleo de Cróton, fenol e histamina, pela análise histológica e pela determinação das enzimas mieloperoxidase (MPO) e N-acetil-β-D-glicosaminidase (NAG) e dos mediadores inflamatórios óxido nítrico (NO), interleucina 6 (IL-6) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α). Os espectros UV obtidos por CLAE-DAD sugerem a presença de flavonoides, especialmente flavonol e flavona. Os teores de fenóis e flavonoides totais variaram de 25,47 a 30,11 mg/g de extrato em equivalente de ácido tânico (EAT) e de 11,84 a 16,95 mg/g de extrato em equivalentes de rutina (ER), respectivamente. Os valores de CE50 variaram de 58,08 ± 15,87 a 257,70 ± 79,47 µg/mL e de 8,491 ± 0,364 a 16,780 ± 0,239 AAR% para os métodos do sequestro do radical livre DPPH• e de redução da complexação do fosfomolibdênio, nessa ordem. Os percentuais de inibição da peroxidação lipídica variaram de 37,51 ± 0,47 a 44,46 ± 0,84%. Em relação à atividade antibacteriana, todos os extratos mostraram-se ativos frente à Salmonella Choleraesuis (ATCC® 10708™) e Salmonella Typhimurium (ATCC® 13311™), com valores de CIM de 5000 µg/mL e efeito bacteriostático. EHJ30, EHJ50, EHJ70 e EHS70 foram ativos frente à Escherichia coli (ATCC® 25922™), com CIM de 5000 µg/mL e efeito bacteriostático. EHJ70 e EHS70 inibiram o crescimento de Staphylococcus aureus subsp. aureus (ATCC® 6538™), com CIM de 5000 µg/mL e efeito bacteriostático. Com relação às cepas de rotina, todos os extratos foram ativos para Salmonella Enteritidis 1406591, 1418594 e 1628260 e para Salmonella spp. resistente à fluoroquinolona 1266695 e 1507788, com CIM de 5000 µg/mL e efeito bacteriostático. EHJ30, EHJ50, EHJ70 e EHS70 inibiram o crescimento de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) 1485279, 1605677, 1830466 e 1664534, com CIM de 5000 µg/mL e efeito bacteriostático. EHS30 foi ativo frente à MRSA 1605677 e 1830466, com CIM de 5000 µg/mL e efeito bacteriostático. Não foi possível determinar os valores de CBM dentro do gradiente de concentração estabelecido para nenhuma cepa testada. Quanto à atividade anti-inflamatória tópica in vivo, no edema de orelha induzido por óleo de Cróton os valores variaram de 74,63 a 85,07% e de 62,03 a 80,34% para a medida e para a massa do edema após 24 h do desafio, respectivamente. No edema de orelha induzido por fenol, os percentuais variaram de 96,46 a 96,73% e de 93,09 a 95,65% para medida e massa do edema, nessa ordem. Naquele induzido por histamina não foi observada diminuição estatística significativa.A inibição da MPO e NAG foi de 55,27 a 81,74% e de 69,04 a 80,82%, respectivamente. Para os mediadores inflamatórios, a inibição foi de 52,24 a 67,43%, de 1,68 a 22,78% e de 3,40 a 23,71%, para NO, IL-6 e TNF-α, nessa ordem. Os resultados obtidos sugerem que K. brasiliensis é uma fonte natural promissora de substâncias bioativas, especialmente da classe dos flavonoides, com elevado potencial anti- inflamatório tópico e atividade antibacteriana digna de ser explorada principalmente para tratar infecções causadas por cepas de Salmonella, destacando essa espécie vegetal como um alvo para descoberta de novos agentes terapêuticos.
Resumen : Kalanchoe brasiliensis Cambess. (Crassulaceae DC.), is a Brazilian native plant popularly known as "saião" and traditionally used in the treatment of inflammatory and infectious diseases. The major secondary metabolites present in this species are phenolic compounds, particularly flavonoids. Based on these data, the present study aimed to investigate the chemical composition and the in vitro antioxidant and antibacterial potentials and the in vivo topical anti-inflammatory activity of the hydroethanolic extracts K. brasiliensis leaves. Fresh leaves collected on January (summer) and September (spring) were extracted with a hydroethanolic solution in concentrations of 30% (HEJ30 and HES30), 50% (HEJ50 and HES50) and 70% (HEJ70 and HES70) of ethanol in water using a mechanical crusher. These extracts were chemically characterized by High Performance Liquid Chromatography coupled with Diode Array Detection (HPLC-DAD). The total phenol and flavonoid contents were determined spectrophotometrically and the antioxidant activity was evaluated by the 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH•) free radical sequestration, the reduction of the phosphomolybdenum complex and the β-carotene/linoleic acid co-oxidation system assays. The antibacterial activity was determined by Minimal Inhibitory Concentration (MIC) using the broth microdilution method against eight ATCC® reference strains and ten routine ones. Subsequently, the Minimal Bactericidal Concentration (MBC) was established and the bactericidal or bacteriostatic antibacterial effect was classified. The topical anti-inflammatory activity was evaluated using Croton- oil, phenol and histamine induced ear edema models, histological analysis, and determinations of myeloperoxidase (MPO) and N-acetyl-β-D-glycosaminidase (NAG) enzymes and nitric oxide (NO), interleukin 6 (IL-6) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) inflammatory mediators. The UV-spectra obtained by HPLC-DAD suggested the presence of flavonoids, specially flavonol and flavone. Total phenol and flavonoid contents ranged from 25.47 to 30.11 mg/g of tannic acid equivalent/g of extract (EAT) and from 11.84 to 16.95 mg/g of rutin equivalent/g of extract (ER), respectively. EC50 values varied of 58.08 ± 15.87 to 257.70 ± 79.47 µg/mL and 8.491 ± 0.364 to 16.780 ± 0.239 RAA% for the DPPH• free radical sequestration and phosphomolybdenum complex reduction methods, in this order. The percentages of inhibition of lipid peroxidation ranged from 37.51 ± 0.47 to 44.46 ± 0.84%. In relation to the antibacterial activity, all extracts were active against Salmonella Choleraesuis (ATCC® 10708™) and Salmonella Typhimurium (ATCC® 13311™), with MIC values of 5000 µg/mL and bacteriostatic effect. HEJ30, HEJ50, HEJ70 and HES70 were active against Escherichia coli (ATCC® 25922™), with MIC of 5000 µg/mL and bacteriostatic effect. HEJ70 and HES70 inhibited the growth of Staphylococcus aureus subsp. aureus (ATCC® 6538™), with MIC of 5000 µg/mL and bacteriostatic effect. In relation to the routine strains, all extracts were active against Salmonella Enteritidis 1406591, 1418594 and 1628260, and for Salmonella spp. fluoroquinolone-resistant 1266695 and 1507788, with MIC of 5000 µg/mL and bacteriostatic effect. HEJ30, HEJ50, HEJ70 and HES70 inhibited the growth of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) 1485279, 1605677, 1830466 and 1664534, with MIC of 5000 µg/mL and bacteriostatic effect. HES was active against MRSA 1605677 and 1830466, with MIC of 5000 µg/mL and bacteriostatic effect. It was not possible to determine the MBC values within the established concentration gradient for any strain tested. With regard to the in vivo topical anti-inflammatory activity, in Croton oil-induced ear edema the values ranged from 74.63 to 85.07% and 62.03 to 80.34% for the measurement and mass of the edema after 24 h of the challenge, respectively. In phenol induced ear edema, the percentages varied of 96.46 to 96.73% and 93.09 to 95.65% for the measurement and mass of the edema, in this order. Considering the edema induced by histamine, no significant statistical decrease was observed.The inhibition of MPO and NAG was 55.27 to 81.74% and from 69.04 to 80.82%, respectively. For the inflammatory mediators, the inhibition was from 52.24 to 67.43%, from 1.68 to 22.78% and from 3.40 to 23.71% for NO, IL-6 and TNF-α, in this order. The obtained results suggest that K. brasiliensis is a promising natural source of bioactive substances, especially of the flavonoid class, with a high topical anti-inflammatory potential and a exploitable antibacterial activity mainly to treat infections caused by Salmonella strains, highlighting this vegetal species as a target for the discovery of new therapeutic agents.
Palabras clave : Kalanchoe brasiliensis
Flavonoides
Antibacterianos
Anti-Inflamatórios
Salmonella
Staphylococcus aureus resistente à meticilina
Kalanchoe brasiliensis
Flavonoids
Anti-bacterial agents
Anti-inflammatory agents
Salmonella
Methicillin-resistant staphylococcus aureus
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA
Idioma: por
País: Brasil
Editorial : Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Sigla de la Instituición: UFJF
Departamento: Faculdade de Farmácia
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas
Clase de Acesso: Acesso Aberto
URI : https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9789
Fecha de publicación : 20-feb-2017
Aparece en las colecciones: Mestrado em Ciências Farmacêuticas (Dissertações)



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