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Type: Artigo de Evento
Title: Peptídeos antimicrobianos: fontes alternativas de defensinas por biblioteca subtrativa de cDNA
Author: Santos, Marcelo de Oliveira
Melo, Talita Diniz
Duque, Ana Paula do Nascimento
Resumo: Os AMPs são pequenas seqüências de peptídeos que constituem a primeira etapa de defesa dos organismos contra a invasão de patógenos. Os mecanismos geralmente propostos para a atividade destes peptídeos envolvem a alteração da membrana celular pela formação de poros ou por outros tipos de perturbação à estrutura da membrana. Os genes que codificam proteínas antifúngicas vêm sendo utilizados na agroindústria para modificação e melhoramento de plantas resistentes ao ataque de fungos. Essas proteínas também estão sendo testadas por indústrias farmacêuticas, com o intuito de se obter novas drogas que poderão ser utilizadas no combate a infecções humanas causadas por fungos. O objetivo do presente projeto é isolar genes diferencialmente expressos entre flores e folhas de Lippia sidoides a fim de conhecer o transcriptoma dessas flores e identificarmos genes codificadores de AMPs, com expressão diferencial, através da construção de uma biblioteca subtrativa de cDNA. Dessa forma poderemos utilizar estes AMPs no combate principalmente do fungo Botrytis cinerea que ataca muitas lavouras, como a de morango. Os genes pertencentes as flores (tester) diferencialmente expressos, quando comparados aos genes presentes nas folhas (driver), foram amplificados. Após duas reações de PCR as seqüências não diferenciais foram suprimidas e subtraídas, de maneira que o produto do PCR continha apenas cDNA de flores diferencialmente expressos. Pouco foi subtraído nas duas hibridizações, supostamente devido à proporção de mRNA. A população de RNAtotal possivelmente gerou um número maior de hibridizações do que o desejado, não sendo o cDNA restante composto apenas de cDNA diferencialmente expresso. O produto de PCR foi ligado ao vetor pGEMTeasy e transformado em linhagem de células competentes. Foi realizada a extração plasmidial de alguns clones isolados, com posterior quantificação e digestão com EcoRI para liberar o inserto do plasmídio. O intuito dessa digestão foi assegurar, antes do seqüenciamento, quais os clones receberam o inserto com o cDNA diferencialmente expresso de flores de L. sidoides. Entretanto, ainda não foram obtidas seqüências correspondentes ao cDNA obtido pela biblioteca SSH de L. sidoides. O estudo segue em andamento. Novas estratégias de amplificações serão traçadas, a fim de se obter produtos de PCR SSH correspondentes as AMP’s; bem como a confirmação da sua atividade antifúngica.
Abstract: -
Keywords: -
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Institution Initials: UFJF
Access Type: Acesso Aberto
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9477
Issue Date: 2008
Appears in Collections:Seminário de Iniciação Científica



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