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Tipo: Dissertação
Título: Os efeitos da interação do tecido adiposo de indivíduos com obesidade sobre fibroblastos pulmonares e seu papel no câncer de mama
Autor(es): Costa, Augusto César da
Primeiro Orientador: Gameiro, Jacy
Co-orientador: Gualberto, Ana Cristina Moura
Membro da banca: Machado, Camila Maria Longo
Membro da banca: Magalhães, Kelly Grace
Resumo: A obesidade está relacionada com a gênese e/ou agravamento de diversas doenças, como o câncer de mama. O desenvolvimento da doença metastática nessa neoplasia está relacionado com pior prognóstico. Todavia, ainda permanece a ser melhor compreendido se e como o tecido adiposo de indivíduos com obesidade (TAO) pode modular células estromais em sítios secundários, como os fibroblastos, e contribuir, dessa forma, para a disseminação das células malignas e metástase. Aqui, investigamos se fatores solúveis e pequenas vesículas extracelulares (pVEs) derivadas do TAO (pVEsOb) poderiam influenciar a alterações funcionais nos fibroblastos, bem como se essas possíveis alterações poderiam aumentar a migração de células tumorais mamárias triplo-negativas MDA-MB-231 in vitro. O tecido adiposo foi obtido de voluntários eutróficos e com obesidade e cultivado em meio de cultura. O sobrenadante foi recolhido e ultracentrifugado para a obtenção de meios depletados de pVEs do TA de indivíduos eutróficos (MdEu) e com obesidade (MdOb) e as pVEsOb. As pVEs isoladas foram caracterizadas por espalhamento dinâmico da luz (DLS) e microscopia eletrônica de transmissão. Fibroblastos pulmonares Wi-38 foram tratados com MdEu, MdOb ou pVEsOb e ensaios de internalização das pVEs, viabilidade, proliferação, formação de colônias e cicatrização in vitro foram realizados. Ademais, foram investigados mediadores solúveis pró-inflamatórios no sobrenadante de fibroblastos trados, além da expressão gênica de genes associados com a ativação de fibroblastos. Os fibroblastos tratados também foram co-cultivados com células MDA-MB-231, utilizando inserto Transwell, para verificar a migração das células tumorais. Isolamos pVEs com diâmetro hidrodinâmico médio de 122,4 nm e morfologia de prato típica de pVEs. Ademais, essas nanovesículas foram internalizadas com sucesso por fibroblastos pulmonares. Nenhum dos tratamentos alterou a proliferação celular e a viabilidade avaliada por método de exclusão por azul de tripan. Todavia, a viabilidade metabólica, avaliada por MTT, foi aumentada em células tratadas com MdEu e diminuída em células tratadas com MdOb, após 48 horas do tratamento. Além disso, pVEsOb diminuíram a viabilidade metabólica 24 e 48h após o tratamento. Observamos que o MdEu, mas não o MdOb, favoreceu a formação de colônias após 14 dias de tratamento. Somente MdEu aumentou a migração coletiva no ensaio de cicatrização in vitro 24 horas após o tratamento. Ademais, observamos o aumento dos mediadores solúveis Ang1, IL1-β, IL-6, RANTES, MIF e TNF-α em fibroblastos tratados com MdOb 24 e 48 horas após o tratamento. pVEsOb induziram apenas a secreção de Ang1 por fibroblastos pulmonares. Não observamos diferença na expressão dos genes S100A4 e CCL2 entre os diferentes grupos. Por fim, não observamos aumento da migração de células MDA-MB-231 co-cultivadas com fibroblastos tratados. Os fibroblastos pulmonares sofrem alterações funcionais no contexto da obesidade, mas nessas condições, in vitro, não estão relacionados no aumento da migração de células tumorais. Entretanto, mais investigações são necessárias para verificar se a comunicação endócrina entre o TAO e fibroblastos pode ser importante para outras fisiopatologias do sistema respiratório, bem como para a quimioatração e ativação de leucócitos que, em conjunto, podem potencializar respostas pró-metastáticas no câncer de mama.
Abstract: Obesity is related to the genesis and/or worsening of several diseases, such as breast cancer. The development of metastatic disease in this neoplasm is related to a worse prognosis. However, it remains to be better understood whether and how adipose tissue from individuals with obesity (OAT) can modulate stromal cells in secondary sites, such as fibroblasts, and thus contribute to the spread of malignant cells and metastasis. Here, we investigated whether soluble factors and small extracellular vesicles (sEVs) derived from OAT (sEVsOb) could influence functional changes in fibroblasts, as well as whether these possible changes could increase the migration of triple-negative breast tumor cells MDA-MB-231 in vitro. Adipose tissue was obtained from eutrophic and obese volunteers and cultivated in culture medium. The supernatant was collected and ultracentrifuged to obtain media depleted of sEVs from the TA of eutrophic (MdEu) and obese (MdOb) individuals and the sEVsOb. Isolated sEVs were characterized by dynamic light scattering (DLS) and transmission electron microscopy. Wi-38 lung fibroblasts were treated with MdEu, MdOb or sEVsOb and sEVs internalization, viability, proliferation, colony formation and in vitro wound healing assays were performed. Furthermore, soluble pro-inflammatory mediators were investigated in the supernatant of treated fibroblasts, in addition to gene expression of genes associated with fibroblast activation. The treated fibroblasts were also cocultured with MDA-MB-231 cells, using Transwell insert, to verify tumor cell migration. We isolated sEVs with an average hydrodynamic diameter of 122.4 nm and dish morphology typical of sEVs. Furthermore, these nanovesicles were successfully internalized by lung fibroblasts. None of the treatments changed cell proliferation and viability assessed by the trypan blue exclusion method. However, metabolic viability, assessed by MTT, was increased in cells treated with MdEu and decreased in cells treated with MdOb, after 48 hours of treatment. Furthermore, sEVsOb decreased metabolic viability 24 and 48h after treatment. We observed that MdEu, but not MdOb, favored colony formation after 14 days of treatment. Only MdEu increased collective migration in the in vitro healing assay 24 hours after treatment. Furthermore, we observed an increase in the soluble mediators Ang1, IL1-β, IL-6, RANTES, MIF and TNF-α in fibroblasts treated with MdOb 24 and 48 hours after treatment. sEVsOb only induced Ang1 secretion by lung fibroblasts. We did not observe any difference in the expression of the S100A4 and CCL2 genes between the different groups. Finally, we did not observe increased migration of MDA-MB-231 cells co-cultured with treated fibroblasts. Lung fibroblasts undergo functional changes in the context of obesity, but under these conditions, in vitro, they are not involved in increased tumor cell migration. However, further investigations are needed to verify whether endocrine communication between the OAT and fibroblasts may be important for other pathophysiology of the respiratory system, as well as for the chemoattraction and activation of leukocytes which, together, may potentiate pro-metastatic responses in breast cancer.
Palavras-chave: Fibroblastos
Obesidade
Metástase
Câncer de mama
Fibroblasts
Obesity
Metastasis
Breast cancer
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Sigla da Instituição: UFJF
Departamento: ICB – Instituto de Ciências Biológicas
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
Attribution-ShareAlike 3.0 Brazil
Licenças Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/16189
Data do documento: 21-Ago-2023
Aparece nas coleções:Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações)



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