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Clase: Dissertação
Título : Polissacarídeos sulfatados da alga Ulva lactuca L.: efeitos na modulação de fatores proinflamatórios em modelos experimentais e na translocação do Fator Nuclear NF - kB em RAW264.7
Autor(es): Silva, Natalia Kelmer da
Orientador: Medeiros, Valquíria Pereira de
Co-orientador: Aguiar, Jair Adriano Kopke de
Miembros Examinadores: Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira
Miembros Examinadores: Ferreira, Ana Paula
Resumo: Atualmente tem sido estudada a atividade biológica de diferentes espécies de algas. A espécie Ulva lactuca, conhecida popularmente como alface do mar, é rica em ulvanas, um polissacarídeo sulfatado que tem sido relacionado com diversas atividades biológicas. O objetivo do trabalho foi a extração de polissacarídeos sulfatados da alga verde U. lactuca L.e a avaliação da atividade anti-inflamatória desses polissacarídeos sulfatados em macrófagos estimulados com LPS. A alga seca foi triturada, delipidada e submetida a proteólise. O cru de polissacarídeos foi submetido a precipitação com quantidades crescentes de acetona, obtendose quatro frações denominadas U30, U50, U70 e U100. As frações foram caracterizadas pordosagem químicas, análise do peso molecular em gel de agarose, cromatografia em gel filtração, eletroforese de carboidratos por fluorófloro (FACE) para análise da composição monossacarídica e ressonância magnética nuclear (RMN). A capacidade de redução do MTT foi avaliada por meio do ensaio de MTT em cultura de macrófagos RAW 264.7. Com o intuito de investigar o potencial anti-inflamatório das frações foi avaliada em cultura celular de macrófagos RAW 264.7 e macrófagos peritoneais de camundongos C57BL/6 a produção de óxido nitríco, a atividade e a expressão das metaloproteinase 2 e 9 por zimografia e western blot, a produção das citocinas pró-inflamatórias TNF-a e IL-6 por ELISA, a translocação do fator nuclear kB, a biogênese de corpúsculos lipídicos e a peroxidação lipídica em macrófagos. As frações apresentaram conteúdo de açúcar entre 4,15 e 6,96 mg/mL; conteúdo de sulfato entre 2,50 e 3,40 mg/mL e urônicos entre 0,74 e 2,86 mg/mL. Não foram detectados fenólicos e proteínas. A avaliação da composição monossacarídica demonstrou a presença de raminose, glicose, galactose e ácidos urônicos. Pela análise do RMN, as frações são formadas pelo ácido ulvanobiurônico tipo A e B. As frações não alteraram a capacidade de macrófagos RAW 264.7 em reduzir o MTT. Nos ensaios antiinflamatórios, a fração U50 reduziu em 17% e 21% a produção de óxido nítrico nas concentrações 12,5 e 25 µg/mL, enquanto a fração U70 reduziu a produção de óxido nítrico em 58 e 70% nas concentrações 12,5 e 25 µg/mL. A fração U70 diminui a atividade da MMP9 na concentração de 25 µg/mL em 69% e a fração U50 nas concentrações 12,5 e 100 µg/mLem 40% e 33%, respectivamente. Ambras as frações, U50 e U70, em 100 µg/mL reduziram a produção de IL-6 em 26% e TNF- em 18% e 26%, respectivamente. A fração U70 foi capaz de reduzir a translocação de NF-kB na concentração 100 µg/mL quando comparada ao controle. A biogênese de corpúsculos lipídicos em macrófagos RAW 264.7 e primáriosincubados com a fração U70 e estimulados com LPS foi reduzida quando comparada com os macrófagos apenas estimulados. A fração U70 foi capaz de reduzir a peroxidação lipídica entre 33 e 55% nas concentrações entre 12,5 e 200 µg/mL. Os resultados sugerem que a fração U70 possui atividade anti-inflamatória potencial in vitro, sendo necessária a investigação de seus mecanismos de ação bem como sua aplicação em modelos animais e celulares para doenças inflamatórias crônicas.
Resumen : Nowadays, have been studying the biological activity of different seaweed species. The specie Ulva lactuca,popularlk known as sea´nlettuce, is a green algae rich in ulvanes, a sulfate polysaccharide that has been relacionated with diverse biological activities. The objective of the work was the extraction of sulfate polysaccharides of Ulva lactuca L. and evaluation of its anti-inflammatory activity in macrophages stimulated with LPS. The seaweed dried was rasureted, delipidated and submitted to proteolysis. The crude polysaccharides was submitted to precipitation by increase amounts of acetone, obtaining four fractions denominated U30, U50, U70 and U100. These compounds were caracterizated by chemical dosages, molecular weigth estimation by agarose gel, gel filtration chromatography, fluorophore assisted carbohydrate electrophoresis (FACE) for monosaccharide composition analyses and nuclear magnetic ressonance (NMR). The capacity of reduce MTT was evaluate by MTT assay in macrophage cell line RAW 264.7. Also investigated the fractions anti-inflammatory activity in macrophages RAW 264.7 and peritoneal macrophage in mice C57BL/6 through production of nitric oxide by Griess method, MMP-2 and 9 activity by zimogram and expression by western blot, production of pro-inflammatory cytokines TNF-TNF-a e IL-6 to ELISA assay, the translocation of nuclear factor kB, the number of lipid droplets in cells and lipid peroxidation in macrophages. The fraction showed sugar content between 4,15 and 6,96 mg/mL, sulfate between 2,50 and 3,40 mg/mL and uronic between 0,74 e 2,86 mg/mL. Phenolic or protein content were not observed. The fractions were composed by rhamnose, glucose, galactose and uronic acid monosaccharides. For NMR analyzes, the fractions U50 e U70 are formed by ulvanobiuronic acids. No one fractions reduce the capacity of macrophages RAW 264.7 in reduce MTT. In the anti-inflammatory assay, the fraction U50 reduced in 17% and 21% the NO production in 12,5 and 25 µg/mL, still U70 fraction reduced the NO production in 58 and 70% in 12,5 e 25 µg/mL concentration. The fraction U70 decreased the activity of MMP-9 in 69% in 25 µg/mL concentration and the fraction U50 in 40 and 33% in 12,5 e 100 µg/mL concentrations. Both fractions, U50 and U70, in 100 µg/mL reduced IL-6 in 26% and TNF-a in 18% and 26%, respectively. The fraction U70 markedly reduced the NF-kB translocation in 100 µg/mL concentration when compared with the control. The lipid droplets biogenesis in macrophages RAW 264.7 and peritoneal stimulated and incubated with U70 were reduced when compare with stimulated standard. The U70 fraction reduced the lipid peroxidation between 33 and 55% in the concentrations between 12,5 and 200 µg/mL. The results suggest that U70 fraction have potencial anti-inflammatory activity in vitro, being necessary the investigation of action mechanisms, thus the application in animals and cellular models for inflammatory cronic diseases.
Palabras clave : Ulva lactuca L
Polissacarídeos sulfatados
Anti-inflamatório
Ulva lactuca L
Sulfate polysaccharides
Anti-inflammatory
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA
Idioma: por
País: Brasil
Editorial : Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Sigla de la Instituición: UFJF
Departamento: Faculdade de Farmácia
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas
Clase de Acesso: Acesso Aberto
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
Licenças Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
URI : https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/14559
Fecha de publicación : 31-jul-2018
Aparece en las colecciones: Mestrado em Ciências Farmacêuticas (Dissertações)



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