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Tipo: Tese
Título: Modulação da ativação de macrófagos por fatores secretados por adipócitos NIH3T3-L1 durante a infecção por Mycobacterium bovis BCG, IN VITRO
Autor(es): Albertoni, Ana Luíza da Silva
Primeiro Orientador: Almeida, Patrícia Elaine de
Membro da banca: Bozza, Patricia Torres
Membro da banca: Teixeira, Lívia
Membro da banca: Mietto, Bruno de Siqueira
Membro da banca: Andreazi, Ana Eliza
Resumo: Introdução: Considerada uma doença crônica e multifatorial, a obesidade é um dos principais problemas de saúde pública no mundo. Além do excesso de gordura corporal, a obesidade é caracterizada por um estado inflamatório de baixo grau, conhecido como metainflamação. Fatores genéticos, ambientais e distúrbios metabólicos têm sido propostos como gatilhos para inflamação que envolve a sinalização/interação entre os adipócitos e macrófagos. Fatores secretados por adipócitos (FSA), são propostos como moduladores de perfil macrofágico (M1, M2) e são capazes de intensificar a inflamação metabólica. Entre eles, estão as citocinas, adipocinas e vesículas extracelulares (VE's). Além disso, fatores de transcrição têm um papel importante como o receptor nuclear PPARγ, ativado por ligantes lipídicos, com propriedades imunorreguladoras na função dos macrófagos. PPARγ induz a formação de corpúsculos lipídicos (CL)s durante infecções por patógenos intracelulares, como por Mycobacterium bovis BCG. Os CLs são organelas dinâmicas com funções no estoque lipídico, síntese de mediadores inflamatórios, sinalização celular e são sítios intracelulares para a sobrevivência de patógenos. Os mecanismos envolvidos na via de sinalização e metabolismo lipídico por fatores secretados por adipócitos e macrófagos, bem como seu impacto no curso da infecção por patógenos intracelulares não estão bem conhecidos. Métodos: as análises de LBs foram realizada por microscopia de campo claro e fluorescência, o ensaio de citocinas por ELISA e expressão de PPARy por Western Blot. O isolamento de EVs foi feito por uma série de centrifugações seguidas de quantificação por citometria de fluxo, caracterização por Zetasizer, e dosagem protéica por Micro BCA. Resultados: A infecção por BCG induz a formação de CLs, que foi potencializada na presença de FSA. Concomitantemente, a expressão do PPARy também foi potencializada por FSA. Além disso, GW9662 inibiu a expressão desse receptor durante a infecção. A produção de TNF-α foi regulada negativamente, enquanto IL-10 e KC foram positivamente modulados em macrófagos infectados e estimulados com FSA. Além disso, a produção de adiponectina foi aumentada em macrófagos controles estimulados com FSA, um efeito que foi inibido durante a infecção por BCG. No estudo sobre o papel das subpopulações de VEs, (microvesículas ou exossomos), verificou-se uma modulação positiva sobre a biogênese dos CLs e a ativação de macrófagos, induzindo a síntese de TNF-α e IL-10. Além disso, as microvesículas foram capazes de induzir KC, que foi modulada negativamente nos grupos infectados, efeito que não foi observado para macrófagos estimulados com exossomos. Conclusão: Nossos resultados sugerem que VEs têm um papel modulador na ativação de macrófagos infectados com BCG, atribuído à formação de CLs, expressão de PPARγ e síntese de citocinas, que podem contribuir para mudanças no estado de polarização destas células. No entanto, estudos futuros ainda serão realizados para ajudar a elucidar os mecanismos de modulação das VEs sobre macrófagos durante infecções por patógenos intracelulares, como M. bovis BCG.
Abstract: Introduction: Considered a chronic and multifactorial disease, obesity is one of the main public health problems in the world. In addition to excess body fat, obesity is characterized by a lowgrade inflammatory state (metainflamation). Genetic, environmental factors and metabolic disorders have been proposed as triggers for inflammation that involves the signaling/interaction between adipocytes and macrophages. Factors secreted by adipocytes (FSA), are proposed as modulators of macrophagic profile (M1, M2) and are able to intensify the metabolic inflammation. Among them, there are cytokines, adipokines and extracellular vesicles (EV's). In addition, transcriptional factors it has an important role, PPARγ is a nuclear receptor activated by lipid ligands, with immunoregulatory properties in the macrophage function. PPARγ induces the lipid bodies (LB)s formation during intracellular pathogens infections, such as Mycobacterium bovis BCG. The LBs are dynamic organelles with functions in the lipid stock, synthesis of inflammatory mediators, cell signaling and function as sites for the survival of pathogens. The mechanisms involved in the signaling pathway activation and lipid metabolism by factors secreted by adipocytes and macrophages, as well as their impact on the course of infection by intracellular pathogens are not well known. Methods: LBs count was performed by fluorescence microscopy, cytokine assay by ELISA, and PPARy expression by Western Blot. Isolation of EVs was done by a series of centrifugations followed by characterization and quantification by flow cytometry, Zeta Size and Micro BCA. Results: BCG infection induce LBs formation, which was potentialized by FSA presence. Concomitantly, the expression of PPARy also was potentialized by FSA. Moreover, GW9662 inhibited the expression of this receptor during the infection. The production of TNF-α was negatively regulated, while IL-10 and KC were up modulated in macrophages infected and stimulated with FSA. Further, the adiponectin production was increased in control macrophages stimulated with FSA, an effect that was inhibited during the BCG infection. Furthermore, subpopulations of EV's, the microvesicles or the exosomes, positively modulate LBs biogenesis and macrophage activation, inducing TNF-α and IL-10 synthesis. In addition, the microvesicles were able to induce KC synthesis, which was negatively modulated in the infected groups, an effect that was not observed for macrophages stimulated with exosomes. Conclusion: Our results suggest that FSA have an important role on BCG-infected macrophages, attributed to the formation of LBs, PPARγ expression, synthesis of cytokines and adipokines, which can contribute to changes in the polarization state. However, future studies will still be carried out to elucidate the real cross-talk between adipocytes and macrophages in the face of infections by intracellular pathogens such as M. bovis BCG
Palavras-chave: Macrófagos
Corpúsculos lipídicos
PPARγ
Microvesículas
Exossomos
Mycobacterium bovis
Macrophages
Lipid bodies
Microvesicles and exosomes
Mycobacterium bovis
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Sigla da Instituição: UFJF
Departamento: ICB – Instituto de Ciências Biológicas
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
Licenças Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
DOI: https://doi.org/10.34019/ufjf/te/2021/00086
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/13697
Data do documento: 15-Dez-2021
Aparece nas coleções:Doutorado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Teses)



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