https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/13690
Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
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Clase: | Dissertação |
Título : | Estudo das propriedades antimicrobianas de Caryocar villosum (Aubl.) Pers. sobre bactérias cariogênicas |
Autor(es): | Domingues, Pâmella Buenos Aires |
Orientador: | Pieri, Fabio Alessandro |
Co-orientador: | Yamaguchi, Klenicy Kazumy de Lima |
Miembros Examinadores: | Souza, Cristian Ferreira de |
Miembros Examinadores: | Carvalho, Fabiola Galbiatti de |
Resumo: | A cárie dentária é um problema de saúde pública, que está associada ao aumento de Streptococcus mutans e Lactobacillus acidogênicos, envolvidos no início e progressão das lesões, respectivamente. Os antimicrobianos padrão-ouro no combate a essas bactérias vêm apresentando efeitos adversos que incentivam o estabelecimento de estudos para identificação de substâncias alternativas para a prevenção da doença. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano de extratos de Caryocar villosum contra bactérias responsáveis pela doença cárie, Streptococcus mutans e Lactobacillus sakei. Extratos de polpa, semente e casca de C. villosum, obtidos com diferentes solventes (etanol, hidroalcóolico, hexano e metanol) em concentrações que variaram de 5 a 0,009 mg/mL, foram testados. Para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM), foi adicionado à placa de 96 orifícios 50 μL das soluções dos extratos ou clorexidina em diferentes concentrações juntamente com 50 μL de cultura bacteriana. Como controle negativo foi utilizado Caldo Infusão Cérebro e Coração (BHI) estéril ao invés da solução dos extratos. Após incubação a 37º C por 48 horas, foi acrescentado resazurina para avaliar a viabilidade celular. A natureza da atividade antimicrobiana, foi avaliada através do tempo de morte dos micro-organismos desafiados a concentrações de ½ CIM e CIM dos extratos, incubadas a 37º C. Alíquotas de 10 μL foram plaqueadas, em intervalos de tempo crescentes até 24 horas, em placas de Petri com ágar BHI, incubadas a 37º C por 24 horas para contagem das unidades formadoras de colônias (UFC/mL). A liberação de proteínas intracelulares das bactérias foi avaliada para avaliação de possível ação dos extratos sobre a parede celular bacteriana, após incubação a 37ºC por 5 horas. Para a avaliação da interferência dos extratos na capacidade de aderência à superfície pelas bactérias, concentrações entre 0,312 a 5 mg/mL foram utilizadas em placas de microtitulação com as culturas das duas bactérias, e incubadas a 37º C por 24 horas. Após esse período os poços foram lavados com água destilada, e adicionados metanol, cristal violeta e por último ácido acético glacial. A quantidade de micro-organismos aderidos à placa foi medida por absorbância a 540nm. Os extratos apresentaram atividade antimicrobiana em CIM variando entre 1,25 e 2,5 mg/mL, para as duas bactérias testadas. Todos os extratos testados contra L. sakei apresentaram ação bactericida, já contra S. mutans a atividade variou entre bacteriostática e bactericida. Mesmo resultados apontando capacidade bactericida para alguns extratos, no teste de liberação de proteínas, não houve indicativo de comprometimento da parede celular, sugerindo que o mecanismo de ação dos extratos sobre as bactérias seja em outro alvo celular. A capacidade de reduzir a aderência bacteriana à superfície foi observada em todas as concentrações testadas, inclusive as subinibitórias, sendo um resultado importante, visto que a cárie é uma doença biofilme-dependente. Os resultados do presente estudo são relevantes para o uso dos diferentes extratos de C. villosum no combate e prevenção da cárie. Novos estudos devem ser conduzidos para identificação dos compostos ativos presentes nos extratos, além da avaliação da toxicidade e danos à mucosa oral para o uso seguro. |
Resumen : | Dental caries is a public health problem that is associated with an increase in acidogenic Streptococcus mutans and Lactobacillus, involved in the onset and progression of lesions, respectively. The gold standard antimicrobials in combating these bacteria have shown adverse effects that encourage the establishment of studies to identify alternative substances for the prevention of the disease. The objective of this work was to evaluate the antimicrobial potential of Caryocar villosum extracts against bacteria responsible for caries disease, Streptococcus mutans, and Lactobacillus sakei. Pulp, seed and peel extracts of C. villosum, obtained with different solvents (ethanol, hydroalcohol, hexane and methanol) at concentrations ranging from 5 to 0.009 mg/mL, were tested. To determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC), 50 μL of extract solutions or chlorhexidine at different concentrations was added to the 96-well plate along with 50 μL of bacterial culture. As a negative control, sterile Brain and Heart Infusion Broth (BHI) was used instead of the extract solution. After incubation at 37º C for 48 hours, resazurin was added to assess cell viability. The nature of the antimicrobial activity was evaluated through the death time of the microorganisms challenged at concentrations of ½ MIC and MIC of the extracts, incubated at 37º C. Ten μL aliquots were plated, at increasing time intervals up to 24 hours, in Petri dishes with BHI agar, incubated at 37º C for 24 hours to count colony forming units (CFU/mL). The release of intracellular proteins from bacteria was evaluated to assess the possible action of the extracts on the bacterial cell wall, after incubation at 37ºC for 5 hours. To assess the interference of extracts on the ability of bacteria to adhere to the surface, concentrations between 0.312 and 5 mg/mL were used in microtiter plates with cultures of the two bacteria and incubated at 37º C for 24 hours. After this period, the wells were washed with distilled water, and methanol, crystal violet and finally glacial acetic acid were added. The number of microorganisms adhered to the plate was measured by absorbance at 540nm. The extracts showed antimicrobial activity in MIC varying between 1.25 and 2.5 mg/mL, for the two tested bacteria. All extracts tested against L. sakei showed bactericidal action, whereas against S. mutans the activity varied between bacteriostatic and bactericidal. Even though results indicate a bactericidal capacity for some extracts, in the protein release test, there was no indication of cell wall impairment, suggesting that the mechanism of action of the extracts on bacteria is in another cell target. The ability to reduce bacterial adhesion to the surface was observed at all concentrations tested, including sub-inhibitory ones, being an important result, since caries is a biofilm-dependent disease. The results of the present study are relevant for the use of different extracts of C. villosum in combating and preventing caries. New studies must be conducted to identify the active compounds present in the extracts, in addition to the evaluation of toxicity and damage to the oral mucosa for safe use. |
Palabras clave : | Frutos amazônicos Extratos naturais Cárie dental Amazonian fruits Natural extracts Dental caries |
CNPq: | CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Editorial : | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) |
Sigla de la Instituición: | UFJF |
Departamento: | ICV - Instituto de Ciências da Vida |
Programa: | Mestrado Acadêmico em Ciências Aplicadas à Saúde |
Clase de Acesso: | Acesso Aberto Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil |
Licenças Creative Commons: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ |
DOI: | https://doi.org/10.34019/ufjf/di/2021/00327 |
URI : | https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/13690 |
Fecha de publicación : | 29-oct-2021 |
Aparece en las colecciones: | Mestrado Acadêmico em Ciências Aplicadas à Saúde |
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