Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/13183
Arquivos associados a este item:
Arquivo Descrição TamanhoFormato 
luancristiandasilva.pdfPDF/A5.6 MBAdobe PDFThumbnail
Visualizar/Abrir
Tipo: Tese
Título: Participação da enzima fosfatidilinositol-3-quinase gama (PI3Kγ) em parâmetros clínicos e neuroinflamatórios da encefalomielite autoimune experimental
Autor(es): Silva, Luan Crístian da
Primeiro Orientador: Ferreira, Ana Paula
Co-orientador: Oliveira, Antônio Carlos Pinheiro de
Membro da banca: Souza, Maria Aparecida de
Membro da banca: Alves, Caio Cesar de Souza
Membro da banca: Gameiro, Jacy
Membro da banca: Hottz, Eugenio Damaceno
Resumo: Introdução: A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença inflamatória autoimune desmielinizante que afeta o sistema nervoso central (SNC). A Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) é um modelo animal para o estudo da EM. A enzima fosfatidilinositol-3-quinase-γ (PI3Kγ) desempenha um papel importante na motilidade e sobrevivência de leucócitos em vários modelos de inflamação. Objetivo: Avaliar o papel da enzima PI3Kγ no desenvolvimento da resposta imune da EAE e ainda, se a inibição desta via contribui de forma neuroprotetora na doença. Metodologia: Camundongos fêmeas C57BL/6 com 6 a 8 semanas de idade do tipo selvagem (WT) ou deficientes de PI3Kγ (KO) foram imunizados com o peptídio da Glicoproteína Mielínica de Oligodendrócitos (MOG35-55) em adjuvante completo de Freund, suplementado com Mycobacterium tuberculosis H37RA e ainda, a Toxina pertussis. Primeiramente, a EAE foi avaliada até o 21ºdpi, sendo que nos 14º e 21º dpi, grupos de animais foram eutanasiados. Os cérebros, medulas espinhais e linfonodos inguinais foram removidos e submetidos a análises como a histopatologia, através da coloração de H&E para visualização de infiltrados inflamatórios e de Luxol FastBlue, do processo de desmielinização no SNC. Através de ELISA, foram mensuradas as citocinas IFN-γ, IL-17, IL-6, TGF-β e IL-10 e as quimiocinas CCL5 e CCL20. A proliferação microglial e astrocitária na medula foram avaliadas pela marcação de células Iba+ e GFAP+, respectivamente, por Imunofluorescência e a marcação de células apoptóticas na medula, por TUNEL. Animais EAE foram tratados com 1mg/kg de FTY720 ou de seu análogo, por gavagem, do 10º ao 20º dpi. No 21º dpi, os animais foram eutanasiados para a realização das análises histopatológicas, dosagem das citocinas e quimiocinas por ELISA, nos cérebros, medulas e linfonodos, e a avaliação da fosforilação da proteína Akt na medula espinhal por Western Blotting. Resultados: Os animais WT-EAE apresentaram o pico da EAE por volta do 19º dpi, enquanto os animais KO-EAE obtiveram um atraso no desenvolvimento da EAE com o pico da EAE reduzido no 20º dpi, em relação ao grupo WT-EAE. A redução de infiltrados inflamatórios e focos de desmielinização foram relacionados a uma menor produção de CCL5, CCL20, IFN-γ, IL-17 no SNC de camundongos KO-EAE nos 14º e 21º dpi, em relação ao grupo WT-EAE. O grupo KO-EAE apresentou menor proliferação microglial e astrocitária no 14ºdpi em relação ao grupo WT-EAE. Nos linfonodos inguinais, tanto a produção de citocinas pró-inflamatórias como a de quimiocinas foram menores no grupo KO-EAE em relação ao grupo WT-EAE, nos dois pontos avaliados. Foi verificado um número maior de células apoptóticas no SNC de animais WT-EAE em ambos os pontos. O tratamento com FTY720 ou seu análogo foi capaz de reduzir o agravamento de sinais clínicos da EAE, infiltração de células inflamatórias, desmielinização, citocinas pró-inflamatórias e ainda, a fosforilação de Akt, o que sugere uma menor ativação da via PI3K/Akt/mTOR. Conclusão: Esses resultados indicam que PI3K é envolvida na sobrevivência, proliferação e migração leucocítica na EAE. Além disso, os compostos FTY720 e seu análogo lipofílico foram capazes de reduzir a neuroinflamação provocada por esta doença no SNC.
Abstract: Introduction: Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune inflammatory disease that affects the central nervous system (CNS). The Encephalomyelitis Autoimmune Experimental (EAE) is an animal model for the study of MS. The enzyme phosphatidylinositol-3-kinase-γ (PI3Kγ) plays an important role in the motility and survival of leukocytes in various inflammation models. Objective: To evaluate the role of the enzyme PI3Kγ in the development of the immune response of EAE and also, if the inhibition of this pathway would be neuroprotective in the disease. Methods: Wild-type (WT) or PI3Kγ (KO) deficient C57BL/6 female mices were immunized with the Oligodendrocyte Myelin Glycoprotein Peptide (MOG35-55) in Freund's complete adjuvant, supplemented with Mycobacterium tuberculosis H37RA and still, pertussis toxin. First, the EAE was evaluated until the 21st day, and in the 14th and 21st dpi groups of animals were euthanized. The brains, spinal cords and inguinal lymph nodes were removed and submitted to histopathological analysis by H & E staining to cellular infiltration and Luxol Fast-Blue staining to CNS demyelination process. Through ELISA, the IFN-γ, IL-17, IL-6, TGF-β and IL-10 cytokines, CCL5 and CCL20 chemokines levels were measured. Microglial and astrocyte proliferation by labeling for Iba+ and GFAP+, respectively, by immunofluorescence and labeling of apoptotic cells in the spinal cords, by TUNEL, were evaluated. EAE were treated with 1mg / kg FTY720 or its analogue, by gavage, from 10th to 20th dpi. At 21º dpi, the animals were euthanized for histopathological analyzes, cytokines levels by ELISA, in the brains, spinal cords and lymph nodes, and the evaluation of protein phosphorylation by Western Blotting. Results: WT-EAE animals had the peak of EAE around the 19th dpi, whereas those of KO-EAE present a delay in the development of EAE with the peak of EAE reduced on 20º dpi, in relation to the WTEAE group. Reduction of infiltrates and foci of demyelination was associated with a lower production of CCL5, CCL20, IFN-γ, IL-17 in the CNS of KO-EAE mice at 14th and 21st dpi, in relation to the WT-EAE group. The KO-EAE group had lower microglial and astrocytic proliferation at 14ºdpi in relation to the WT-EAE group. In the inguinal lymph nodes, both proinflammatory cytokine production and chemokines were lower in the KO-EAE group than in the WT-EAE group at the two evaluated points. A larger number of apoptotic cells was observed in the CNS of WT-EAE animals at both points. Treatment with FTY720 or its analogue was able to reduce the worsening of clinical signs of EAE, infiltration of inflammatory cells, demyelination, proinflationary cytokines and also, phosphorylation of Akt, which became a less activation of the pathway PI3K/Akt/mTOR. Conclusion: The results indicate that PI3K is importante to survival, proliferation and migration of the leukocytes in EAE. In addition, compounds FTY720 and its lipophilic analog have been able to reduce the neuroinflammation caused by this disease in the CNS.
Palavras-chave: EM
EAE
PI3K-γ
FTY720
Análogo
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Sigla da Instituição: UFJF
Departamento: ICB – Instituto de Ciências Biológicas
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
Licenças Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nd/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/13183
Data do documento: 27-Fev-2019
Aparece nas coleções:Doutorado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Teses)



Este item está licenciado sob uma Licença Creative Commons Creative Commons