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Type: Dissertação
Title: Efeito do laser de baixa potência em mecanismos de reparo de membrana e biogênese de corpúsculos lipídicos em células musculares: papel na infecção por Trypanosoma cruziin vitro
Author: Rampinelli, Pollianne Garbero
First Advisor: Almeida, Patrícia Elaine de
Co-Advisor: Bizarro, Heloísa D’Ávila da Silva
Referee Member: Paoli, Flávia de
Referee Member: Machado, Patrícia de Almeida
Resumo: Amembrana plasmática (MP) é uma estrutura suscetível a danos e que devido a isso apresenta um mecanismo de reparo de membrana (RM) eficiente, essencial para a sobrevivência celular. Um dos mecanismos de reparo consiste na endocitose do dano e selamento da MP mediada por influxo de cálcio. Subvertendo a maquinaria de reparo ao desencadear lesões na MP, protozoários como o Trypanosoma cruzi conseguem adentrar mais facilmente as células utilizando vesículas endocíticas formadas durante a ativação destes processos. O T. cruzi também é capaz de manipular a biogênese de Corpúsculos Lipídicos (CLs), organelas biológicamente ativas, presentes no citoplasma de células eucarióticas.Adicionalmente, a terapia com laser de baixa potência (LBP) consiste na aplicação de um feixe de luz coerente, colimada e monocromática, de baixos valores de energia como método de potencialização da regeneração e regulação de distúrbios funcionais. Sabendo-se da importância do RM e dos CLs para respostas celulares e durante a infecção, o objetivo desse trabalho foi investigar o efeito do LBP no mecanismo de RM e na biogênese de CLs na ausência ou não de infecção celular por T. cruzi. Células musculares indiferenciadas (mioblastos) e diferenciadas (miotubos) de linhagem C2C12, infectadas com a cepa DM28c de T. cruzi,foram irradiadas com LBP no comprimento de onda de 808 nm, potência de saída de 100 mW, dose de 30J/cm2, por 8 segundos, modo contínuo de emissão de luz, de foma pontual em uma única sessão. Posteriormente as culturasforam infectadas com T. cruzie encaminhadas para análises de microscopia, Western Blot e ELISA.Nossos resultados demonstraram que a irradiação com o LBP induziu o aumento da ativação do RM dependente de cálcio em mioblastos e miotubos. Conforme esperado, a infecção por T. cruzi aumentou a formação de CLs. Porém, em miotubos irradiados previamente houve uma diminuição dessas organelas.O LBP gerou um aumento da biogênese de CLs em células não-infectadas. A irradiação também foi capaz demodular mediadores inflamatórios ao diminuir os níveis de IL-6,IL-10 e TNF-α em células musculares infectadas. Assim, nossos resultados demostraram acapacidade de modulação do LBP no mecanismo de RM, na biogênese de CLs e de mediadores inflamatóriosem modelo de infecção por T. cruzi, sugerindo um papel do LBP na permeabilização da MP,no metabolismo lipídico celular e naresposta imunológica.
Abstract: Plasma membrane (PM) is a structure susceptible to damage and due to this presents an efficient membrane repair mechanism (MR), essential for cell survival.One of the repair mechanisms is endocytosis of damage and sealing of the PM mediated by calcium influx.By subverting the repair machinery by triggering PM injuries, protozoa such as Trypanosoma cruzi can more easily enter cells using endocytic vesicles formed during activation of these processes.T. cruzi is also capable of manipulating the biogenesis of lipid bodies (LBs), biologically active organelles present in the eukaryotic cell cytoplasm.Additionally, low level laser therapy (LLL) consists of the application of a coherent, collimated and monochromatic beam of light with low energy values as a method of enhancing the regeneration and regulation of functional disorders. Knowing the importance of MR and LBs for cellular responses and during infection, the objective of this study was to investigate the effect of LLL on the mechanism of MR and LBs biogenesis in theabsence or not of cellular infection by T. cruzi.Undifferentiated (myoblasts) and differentiated (myotubes) muscle cells of the C2C12 strain infected with the T. cruzi DM28c strain were irradiated with LLL, at 808 nm wavelength, 100 mW output power, 30 J / cm2 dose, for 8 seconds, continuous light-emitting mode, spot-time in a single session. Afterwards the cultures were infected with T. cruzi and sent for microscopy, Western Blot and ELISA analysis.Our results demonstrated that LLL irradiation induced increased calcium-dependent MR activation in myoblasts and myotubes. As expected, T. cruzi infection increased the formation of LBs. However, in previously irradiated myotubes there was a decrease in these organelles. LLL generated an increase in LBsbiogenesis in uninfected cells. The irradiation was also able to modulate inflammatory mediators by decreasing IL-6, IL-10 and TNF-α levels in infected muscle cells.Thus, our results demonstrated the capacity of LLL modulation in the MR mechanism, in the biogenesis of LBs and inflammatory mediators in a T. cruzi infection model, suggesting a role of LLL in PM permeabilization, cellular lipid metabolism and immune response.
Keywords: Reparo de membrana
Trypanosoma cruzi
Corpúsculos lipídicos
Laser de baixa potência
Células musculares
Membrane repair
Trypanosoma cruzi
Lipid bodies
Low level laser
Muscle cells
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Institution Initials: UFJF
Department: ICB – Instituto de Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia
Access Type: Acesso Aberto
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
Creative Commons License: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/11432
Issue Date: 8-Nov-2019
Appears in Collections:Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações)



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