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Type: Dissertação
Title: Composição química e efeito antibiótico das frações diclorometânicas floral e foliar de Vernonia polyanthes Less. (Asteraceae Bercht. & J. Presl)
Author: Fernandes, Laura Silva
First Advisor: Alves, Maria Silvana
Co-Advisor: Araújo, Ana Lúcia Santos de Matos
Co-Advisor: Perroni, Ítalo Tuler
Referee Member: Pellegrino, Flávia Lúcia Costa
Referee Member: Costa, Juliana de Carvalho da
Resumo: Vernonia polyanthes Less. (Asteraceae Bercht & Presl.) é uma planta nativa da América do Sul, popularmente conhecida no Brasil como assa-peixe e tradicionalmente usada para o tratamento de gripe, resfriado, bronquite, problemas intestinais e renais, infecção uterina, úlceras e febre. O presente estudo teve como objetivo investigar as composições químicas e os efeitos antibióticos das frações diclorometânicas floral (DF-Vp) e foliar (DL-Vp) obtidas desta espécie vegetal. Folhas e flores foram extraídas em soluções hidroetanólicas 70% e submetidas a partição líquido/líquido com hexano (HF-Vp/HL-Vp) seguida de diclorometano (DF-Vp/DL- Vp). Inicialmente, foi realizada uma triagem do efeito antibiótico in vitro dos extratos e frações por meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Bactericida Mínima (CBM), seguida pela classificação do efeito antibiótico frente as cepas de referência ATCC® Staphylococcus aureus (ATCC® 25923™, ATCC® 29213™ e ATCC® 6538™), Escherichia coli (ATCC® 10536™ e ATCC® 25922™), Salmonella Choleraesuis (ATCC® 10708®), Salmonella Typhimurium (ATCC® 13311™) e Pseudomonas aeruginosa (ATCC® 9027™ e ATCC® 27853™), que destacou DF-Vp e DL-Vp como as mais promissoras. Os perfis químicos de DF-Vp e DL-Vp foram estabelecidos por meio de cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrômetro de massas (CG-EM), que revelou a presença de terpenoides e flavonoides, marcadores quimiotaxonômicos de V. polyanthes. O efeito antibiótico de DL-Vp e DF-Vp foi aprofundado frente as cepas de referência Salmonella Choleraesuis (ATCC® 10708™) e Salmonella Typhimurium (ATCC® 13311™) e clínicas humanas Salmonella Enteritidis 1428260 e Salmonella spp. 1507708 por meio dos ensaios do efeito combinatório, tempo de morte bacteriana, viabilidade celular e extravasamento de substâncias absorvidas a 280 nm. Adicionalmente, foi investigado se o metabólito lupeol seria o principal responsável pelo efeito antibiótico desta espécie vegetal. DL-Vp foi ativo frente a S. Choleraesuis (ATCC® 10708™), S. Typhimurium (ATCC® 13311™) e Salmonella spp. 1502596 e 1266695, com CIM igual a 625 μg/mL, e Salmonella spp. 1553217 e 1507708 e S. Enteritidis 1428260, com CIM de 1250 μg/mL. DF-Vp se mostrou ativo frente a Salmonella spp. 1502596 (CIM = 625 μg/mL) e também inibiu o crescimento de S. Choleraesuis (ATCC® 10708™), S. Typhimurium (ATCC® 13311™) e S. Enteritidis 1428260 com CIM de 1250 μg/mL, e Salmonella spp. 1507708 e 1266695 (CIM = 2500 μg/mL). Com exceção de DL-Vp frente a S. Typhimurium (ATCC® 13311™) com CIM de 5000 μg/mL e efeito bactericida, os demais foram classificados como bacteriostáticos para ambas as frações e cepas testadas. O sinergismo entre DL-Vp e DF- Vp e os antibióticos se mostrou cepa dependente. O ensaio do tempo de morte bacteriana demonstrou que DL-Vp e DF-Vp diminuíram a densidade populacional bacteriana e, na maioria dos casos, os tratamentos com essas frações foram mais eficientes do que com os antibióticos. Finalmente, a citotoxicidade foi determinada pelo bioensaio com Artemia salina e as frações diclorometânicas foram classificadas como atóxicas. Os resultados revelaram o efeito antibiótico promissor de V. polyanthes, principalmente frente a Salmonella, incluindo cepas clínicas resistentes à levofloxacino e ampicilina. Além disso, constatou-se que lupeol não foi o principal responsável por esse efeito nesta espécie vegetal.
Abstract: Vernonia polyanthes Less. (Asteraceae Bercht & Presl.), is a native South American plant, popularly known in Brazil as "assa-peixe" and traditionally used in the treatment of flu, cold, bronchitis, intestinal and kidney disorders, uterine infection, ulcers and fever. Thus, the present study aimed to investigate the chemical compositions and antibiotic effects of floral (DF-Vp) and foliar (DL-Vp) dichloromethane fractions. Fresh leaves and flowers were extracted with hydroethanolic solutions 70% and subjected to liquid / liquid partition with hexane (HF-Vp / HL-Vp) and dichloromethane (DF-Vp / DL-Vp). Initially, an in vitro screening of the antibiotic effect of extracts and fractions from this plant species was established by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC), followed by the classification of the antibiotic effect against Staphylococcus aureus (ATCC® 25923™, 29213™ and 6538™), Escherichia coli (ATCC® 10536™ and 25922™), Salmonella Choleraesuis (ATCC® 10708™), Salmonella Typhimurium (ATCC® 13311 ™) and Pseudomonas aeruginosa (ATCC® 9027 ™ and 27853 ™), revealing DF-Vp and DL-Vp as the most promising. DF-Vp and DL-Vp chemical profiles were analyzed by gas chromatography coupled to a mass spectrometry detector (GC-MS) that showed the presence of terpenoids and flavonoids, chemotaxonomic markers of V. polyanthes. The antibiotic effect of DL-Vp and DF- Vp was further investigated against Salmonella Choleraesuis (ATCC® 10708™), Salmonella Typhimurium (ATCC® 13311™) and Salmonella Enteritidis 1428260 and Salmonella spp. 1507708 clinical strains by the combinatorial effect, time kill, cellular viability and leakage of compounds absorbing at 280 nm assays. Additionally, we investigated if lupeol could be the main responsible for the antibiotic effect of this plant species. DL-Vp was active against S. Choleraesuis (ATCC® 10708 ™), S. Typhimurium (ATCC® 13311™), and Salmonella spp. 1502596 and 1266695, with MIC values of 625 μg/mL, and Salmonella spp. 1553217 and 1507708 and S. Enteritidis 1428260, with MIC of 1250 μg/mL. DF-Vp was active against Salmonella spp. 1502596 (MIC = 625 μg/mL) and also against S. Choleraesuis (ATCC® 10708™), S. Typhimurium (ATCC® 13311™) and S. Enteritidis 1428260 with MIC values of 1250 μg/mL, and Salmonella spp. 1507708 and 1266695 (MIC = 2500 μg/mL). With the exception of DL-Vp against S. Typhimurium (ATCC® 13311™) with MIC values of 5000 μg/mL and bactericidal effect, the other fractions were classified as bacteriostatic against the other strains. The synergism between DL-Vp and DF-Vp and the antibiotics was dependent strain. The time kill test showed that DL-Vp and DF-Vp decreased bacterial population density, and in most cases, treatments with these fractions were more efficient than the antibiotics. Finally, cytotoxicity was determined by Artemia salina bioassay and the dichloromethanic fractions were classified as nontoxic. The results revealed the promising antibiotic effect of V. polyanthes, mainly against Salmonella, including clinical strains that were resistant to levofloxacin and ampicillin. In addition, it was possible to affirm that it was observed that lupeol was not the main responsible for this effect in this plant species.
Keywords: Vernonia polyanthes
Asteraceae
Salmonella spp
Lupeol
Antibiótico
Vernonia polyanthes
Asteraceae
Salmonella spp.
Lupeol
Antibiotic
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Institution Initials: UFJF
Department: Faculdade de Farmácia
Program: Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas
Access Type: Acesso Aberto
Creative Commons License: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/10625
Issue Date: 8-Jul-2019
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