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Type: Dissertação
Title: Proteômica diferencial em plantas transgênicas de Nicotiana benthamiana e testes da resistência em Solanum tuberosum induzida pelo mesmo gene contra Pectobacterium atrosepticum
Author: Costa, Laura Santos Martins
First Advisor: Santos, Marcelo de Oliveira
Co-Advisor: Quellis, Leonardo Ramos
Referee Member: Ramada, Marcelo Henrique Soller
Referee Member: Vasconcelos, Eveline Gomes
Referee Member: Pereira, Jorge Fernando
Referee Member: Souza, Saulo Marçal de
Resumo: O gene sintético DomB, isolado da fração da apirase de batata (Solanum tuberosum), apresenta atividade antigênica em animais e confere resistência a plantas de fumo (Nicotiana benthamiana) à infecção bacteriana por Pectobacterium atrosepticum. No presente trabalho, propusemos a análise proteica diferencial em plantas de Nicotiana benthamiana geneticamente modificadas com o gene sintético g2S2-6His-DomB por nanoUPLC-MSE. Para esse fim, comparamos o conteúdo proteico da progênie hemizigótica R0 de N. benthamiana modificadas geneticamente com o gene ao conteúdo proteico de N. benthamiana selvagem, e desses grupos desafiados com P. atrosepticum. Além disso, propusemos a avaliação da atividade do mesmo gene em S. tuberosum via agroinfiltração. A partir da análise das proteínas tripsinizadas, os resultados sugerem que ocorre a produção de proteínas possivelmente ligadas à sinalização de defesa quando as plantas são submetidas à um desafio com uma fitobactéria, porém devido ao baixo número de identificações, temos como perspectiva repetir os experimentos com um maior número de réplicas. As análises preliminares com a cultivar comercial Solanum tuberosum cv. Asterix da expressão transiente do mesmo gene sintético pelo método de infiltração via Agrobacterium cepa 3101 contendo o plasmídeo pk7WG2D-gfp-g2S2-6His-DomB, comparada a outro grupo onde houve a co-infiltração com Agrobacterium EHA101 contendo TCV-CP, que funciona como um supressor do silenciamento de genes pós-transcricionais, apresentou resultado promissor. Após o quinto dia de agroinfiltração, as folhas de S. tuberosum com 5 - 8 semanas foram desafiadas com a bactéria fitopatogênica e observadas por mais sete dias. Ao final desse período observamos que houve uma reação de hipersensibilidade no local de aplicação, mas que tal processo não se expandiu por todo o tecido foliar. O imunoensaio dot-blot sugere a expressão do polipeptídeo p2S26His-DomB nas folhas infiltradas com o plasmídeo e com o TCV-CP. Buscando obter cultivares resistentes a um problema nas culturas de batata, que é a infecção por P. atrosepticum, o projeto pode potencialmente adicionar informações sobre os mecanismos de defesa das plantas modificadas geneticamente com o gene g2S2-6His-DomB e propiciar uma melhor ação na produção de plantas transgênicas resistentes a fitopatógenos com o gene sintético DomB.
Abstract: The DomB synthetic gene isolated from potato (Solanum tuberosum) apyrase fraction has demonstrated anti-gene activity in animals and resistance of tobacco (Nicotiana benthamiana) plants against Pectobacterium atrosepticum. In this work we propose differential proteic profile analysis in Nicotiana benthamiana plants genetically modified with g2S26His-DomB synthetic gene by nanoUPLC-MSE tool. We compared the R0 hemizigotic progenie protein content of transgenic N. benthamiana with native N. benthamiana protein content, and these groups challenged with P. atrosepticum. Moreover, we proposed the evaluation of this gene activity in S. tuberosum by agroinfiltration. Trypsinized proteins initial analyses suggests that defense sinalization proteins were produced by N. benthamiana. The preliminary analysis of Solanum tuberosum cv. Asterix commercial cultivar of transiently expressing the same quimeric gene by agro-infiltration method using Agrobacterium 3101 with pk7WG2D-gfp-g2S2-6His-DomB plasmid, compared to another group where exist co-infiltration with Agrabacterium EHA101 containing TCV-CP, that works like a suppressor of silencing of post- transcriptional gene, showed promising results. After the fifth day of agro-infiltration, 5 - 8weeks S. tuberosum leaves were, tested with phytopathogenic bacterium and observed for seven days. By the end of this period, a hypersensitivity reaction was observed at application site which did not expanded for the whole leaf tissue. The dot-blot immunoassay suggest that the expression of p2S26His-DomB polypeptide, in infiltrated leaf wih plasmid and TCV-CP. To get resistant cultivars against P. atrosepticum infection, this work can add information about defensive mechanism of transgenic plants with g2S2-6His-DomB gene and get a better production of transgenic potato plants resistant to phytopathogenic with DomB synthetic gene.
Keywords: Domínio B
Nicotiana benthamiana
Proteômica
Pectobacterium atrosepticum
Solanum tuberosum
B domain
Nicotiana benthamiana
Proteomic
Pectobacterium atrosepticum
Solanum tuberosum
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Institution Initials: UFJF
Department: ICB – Instituto de Ciências Biológicas
Program: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia
Access Type: Acesso Embargado
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
metadata.dc.rights.uri: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/10228
Issue Date: 15-Mar-2019
Appears in Collections:Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações)



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