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| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| alexandresilvachaves.pdf | 1.52 MB | Adobe PDF |  View/Open |
| Type: | Dissertação |
| Title: | Efeito da proteína de fusão ESAT6:CFP10 e do antígeno recombinante Rv1733 na modulação da produção de TNF- α e expressão de seus receptores em células RAW264.7 |
| Author: | Chaves, Alexandre Silva |
| First Advisor: | Teixeira, Henrique Couto |
| Referee Member: | Almeida, Caroline de Souza |
| Referee Member: | Carvalho, Wanessa Araújo |
| Resumo: | A tuberculose é uma doença infecciosa cujo principal agente etiológico é o Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Macrófagos constituem a primeira linha de defesa contra a tuberculose, bem como o habitat preferencial para o Mtb. Antígenos específicos do Mtb tais como ESAT-6, CFP-10 e Rv1733 podem modular a produção de citocinas, influenciando o curso da infecção. Macrófagos infectados liberam uma grande quantidade de citocinas incluindo fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a). As ações do TNF-a são iniciadas por seus dois receptores de membrana, mTNF-R1 e mTNF-R2, os quais podem sofrer clivagem proteolítica, resultando nas formas solúveis sTNF-R1 e sTNF-R2, respectivamente. No presente estudo, macrófagos RAW264.7 (2x105/mL) foram estimulados com a proteína de fusão ESAT6:CFP10 ou com o antígeno recombinante DosR, Rv1733, na concentração de 5pg/mL por 24 e 48 horas e a produção de TNF-a, bem como a expressão dos mTNF-Rs e concentração dos sTNF-Rs foram investigadas. Os sobrenadantes de cultura foram coletados e os níveis de TNF-a, IL-10, sTNF-R1 e sTNF-R2 foram avaliados por ELISA, enquanto que os níveis de óxido nítrico (NO) foram analisados pela reação de Griess. A determinação da viabilidade celular foi realizada pelo ensaio de MTT. Níveis de mTNF-R1 e mTNF-R2 foram analisados por citometria de fluxo e a expressão de iNOS e Arg-1 determinada por imunocitoquímica. Os resultados mostraram que ambos os antígenos induziram um aumento na expressão de TNF-a (p<0,05) sem afetar os níveis de NO, IL-10, iNOS e Arg-1. A expressão elevada de mTNF-R1 (p<0,05) em células RAW264.7 foi observada para ambos os antígenos após 24 horas de cultura, mas apenas o Rv1733 foi capaz de diminuir os níveis de sTNF-R1 (p<0,05) nos sobrenadantes de cultura. A expressão de mTNF-R2 e a detecção de sTNF-R2 (p<0,05) foi maior após estimulação com Rv1733, em 24 e 48 horas de cultura. Esses resultados sugerem que a proteína de fusão ESAT6:CFP10 e o antígeno DosR, Rv1733, modulam diferentemente a produção de TNF-a e a expressão de seus receptores em macrófagos, o que influenciar na suscetibilidade à infecção. |
| Abstract: | Tuberculosis is a severe infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Macrophages provide a first line of defense against tuberculosis and major habitat for Mtb. Specific Mtb antigens, such as ESAT-6, CFP-10 and Rv1733, may modulate the production of cytokines, influencing the course of infection. Infected macrophages release a range of cytokines including tumor necrosis factor-alpha (TNF-a). TNF-a actions are triggered by its two membrane receptors, mTNF-R1 and mTNF-R2, which may undergo a shedding process, resulting in the soluble form sTNF-R1 and sTNF-R2, respectively. In the present study, RAW264.7 macrophages (2 x 105/mL) were stimulated with the fusion protein ESAT6:CFP10 or the recombinant DosR antigen Rv1733 at 5[1,g/mL for 24 and 48 hours and the production of TNF-a and expression membrane and soluble TNFRs were investigated. Culture supernatants were collected and levels of TNF-a, IL-10, sTNF-R1 and sTNF-R2 evaluated by ELISA, while levels of nitric oxide (NO) were assessed by the Griess reaction. To determine cell viability the MTT assay was used. Levels of mTNF-R1 and mTNF-R2 were analysed by flow cytometry and the expression of iNOS and Arg-1 were determined by immunocytochemistry. The results show that both antigens induced an increase in TNF-a production (p<0.05) without affecting levels of NO, IL-10, iNOS and Arg-1. Elevated expression of mTNFR1 (p<0,05) in RAW264.7 cells was observed for both antigens after 24h of culture, but only Rv1733 decreased sTNF-R1(p<0,05) in culture supernatants. Expression of mTNF-R2 and detection of sTNF-R2 (p <0.05) was enhanced by Rv1733 after 24h and 48h of culture. These results suggest that the fusion protein ESAT6:CFP10 and the DosR antigen Rv1733 differentially modulate the production of TNF-a and the expression of its receptors on macrophages, which may affect the susceptibility to infection. |
| Keywords: | Tuberculose Macrófagos ESAT6:CFP10 Rv1733 TNF-α Receptores de TNF Tuberculosis Macrophages ESAT6:CFP10 Rv1733 TNF-α TNF receptors |
| CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS |
| Language: | por |
| Country: | Brasil |
| Publisher: | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) |
| Institution Initials: | UFJF |
| Department: | ICB – Instituto de Ciências Biológicas |
| Program: | Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia |
| Access Type: | Acesso Aberto |
| URI: | https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/5282 |
| Issue Date: | 29-Aug-2014 |
| Appears in Collections: | Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações) |
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