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Type: Tese
Title: Avaliação do efeito anti-inflamatório e anti-proliferativo de Condroitim sulfato e/ou Glucosamina em células RAW 264.7, IEC-6 e Caco-2
Author: Oliveira, Luiz Gustavo de
First Advisor: Chebli, Julio Maria Fonseca
Co-Advisor: Aguiar, Jair Adriano Kopke de
Referee Member: Ribeiro, Tarsila Campanha da Rocha
Referee Member: Caneschi, César Augusto
Referee Member: Soares, Roberta Reis
Referee Member: Gomes, Kátia das Neves
Resumo: Condroitim sulfato (CS) e Glucosamina (GlcN) são atualmente indicados para o tratamento de doenças inflamatórias, como osteoartrite, por reduzir em condrócitos a ação do fator de transcrição nuclear NF-kB, atividade de metaloproteinases (MMP), interleucinas, óxido nítrico sintase induzível (iNOS) entre outros mediadores inflamatórios. O objetivo do presente trabalho, foi investigar os efeitos de CS, GlcN e CS/GlcN sobre modelo de inflamação agudo induzido por lipopolissacarídio (LPS) em linhagens celulares RAW 267.4, IEC-6 e Caco-2) bem como entender o mecanismo molecular deste efeito sobre essas linhagens celulares. CS, GlcN e CS/GlcN, foram caracterizados pordiferentes métodos, entre eles, eletroforese em gel de agarose e em gel de poliacrilamida, fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis (FACE), e 13C RMN. A atividade anti-inflamatória de CS e GlcN associados ou não foi avaliada pela produção de óxido nítrico (NO), atividade de metaloproteases (MMP-9 e -2), liberação de TNF-a, IL-6 e IL-1b por ELISA. Além do deslocamento nuclear do NF-kB por microscopia confocal de imunofluorescência e expressão de IL-1b e iNOS. As análises demonstraram que o CS utilizado nos testes é caracterizado por ser do tipo 4 sulfatado. CS, GlcN e CS/GlcN foram capazes de reduzir a expressão de iNOS e a produção de NO, além de reduzir os níveis de produção de TNF-a nos macrófagos RAW 264.7. Já CS/GlcN e GlcN reduziram a atividade de MMP-9, e a produção de IL-1b, mantendo uma maior expressão de proIL-1b. CS, GlcN e CS/GlcN também diminuiram o deslocamento nuclear do fator de transcrição NF-kB. Dessa forma, esses resultados indicam que CS e GlcN associados ou não apresentam uma atividade anti-inflamatória frente à macrófagos RAW 264.7. Com relação à resposta dos compostos estudados frente as células IEC-6 e Caco-2, não foi possível avaliar nas condições disponíveis, uma vez, que foi possível estimular um processo inflamatório nas mesmas.
Abstract: Chondroitin Sulfate (CS) and Glucosamine (GlcN) are currently indicated for the treatment of inflammatory diseases, such as osteoarthritis, by reducing the action of nuclear transcription factor NF-kB, metalloproteinase activity (MMP), interleukins, nitric oxide synthase inducible (iNOS) among other inflammatory mediators. The objective of the present study was to investigate the effects of CS, GlcN,and CS/GlcN on the model of acute inflammation induced by lipopolysaccharide (LPS) in cell lines RAW 267.4, IEC-6 and Caco-2, as well as, to understand the molecular mechanism of this effect on macrophages RAW 264.7, IEC-6 and Caco-2. CS and GlcN were characterized by agarose gel electrophoresis, polyacrylamide gel for molecular weight, fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis (FACE), and 13C NMR. The anti-inflammatory activity of CS and GlcN associated or not was evaluated by the production of nitric oxide (NO), metalloproteinases activity (MMP-9 and -2), TNF-a, IL-6 and IL-1b by ELISA. In addition, translocation of NF-κB by confocal immunofluorescence microscopy, and expression of IL-1b and iNOS. The analyzes showed that the CS used in the tests is characterized as a chondroitin 4sulfate. CS, GlcN and CS/GlcN were able to reduce iNOS expression and NO production. In addition to reducing levels of TNF-a in RAW 264.7 macrophages. Already CS/GlcN and GlcN reduced the activity of MMP-9, and the production of IL1b, maintaining a higher pro-IL-1b expression. Cs, GlcN and CS/GlcN also decreased the nuclear translocationt of the NF-kB. Thus, these results indicate that CS and GlcN associated or not, present an anti-inflammatory activity against RAW 264.7 macrophages. With regard to the response of the compounds studied to IEC-6 and Caco-2 cells, it was not possible to evaluate in the available conditions, once, that we can not stimulate an inflammatory process in them.
Keywords: Anti-inflamatório
Condroitim sulfato
Glucosamina
RAW 264.7
Lipopolissacarídeo
NF-kB
Anti-inflammatory
Chondroitin sulfate
Glucosamine
RAW 264.7
Lipopolysaccharide
NF-kB
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Institution Initials: UFJF
Department: Faculdade de Medicina
Program: Programa de Pós-graduação em Saúde Brasileira
Access Type: Acesso Aberto
Creative Commons License: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/11167
Issue Date: 5-Aug-2019
Appears in Collections:Doutorado em Saúde (Teses)



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