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Proteômica diferencial em plantas transgênicas de Nicotiana benthamiana e testes da resistência em Solanum tuberosum induzida pelo mesmo gene contra Pectobacterium atrosepticum

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dc.contributor.advisor1 Santos, Marcelo de Oliveira
dc.contributor.advisor1Lattes buscatextual.cnpq.br pt_BR
dc.contributor.advisor-co1 Quellis, Leonardo Ramos
dc.contributor.advisor-co1Lattes http://lattes.cnpq.br/0788365993232663 pt_BR
dc.contributor.referee1 Ramada, Marcelo Henrique Soller
dc.contributor.referee1Lattes http://lattes.cnpq.br/9066392392678813 pt_BR
dc.contributor.referee2 Vasconcelos, Eveline Gomes
dc.contributor.referee2Lattes http://lattes.cnpq.br/9961013633092279 pt_BR
dc.contributor.referee3 Pereira, Jorge Fernando
dc.contributor.referee3Lattes http://lattes.cnpq.br/1568875950216131 pt_BR
dc.contributor.referee4 Souza, Saulo Marçal de
dc.contributor.referee4Lattes http://buscatextual.cnpq.br pt_BR
dc.creator Costa, Laura Santos Martins
dc.creator.Lattes http://lattes.cnpq.br/1350015206660407 pt_BR
dc.date.accessioned 2019-07-08T18:32:59Z
dc.date.available 2019-06-28
dc.date.available 2019-07-08T18:32:59Z
dc.date.issued 2019-03-15
dc.identifier.uri https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/10228
dc.description.abstract The DomB synthetic gene isolated from potato (Solanum tuberosum) apyrase fraction has demonstrated anti-gene activity in animals and resistance of tobacco (Nicotiana benthamiana) plants against Pectobacterium atrosepticum. In this work we propose differential proteic profile analysis in Nicotiana benthamiana plants genetically modified with g2S26His-DomB synthetic gene by nanoUPLC-MSE tool. We compared the R0 hemizigotic progenie protein content of transgenic N. benthamiana with native N. benthamiana protein content, and these groups challenged with P. atrosepticum. Moreover, we proposed the evaluation of this gene activity in S. tuberosum by agroinfiltration. Trypsinized proteins initial analyses suggests that defense sinalization proteins were produced by N. benthamiana. The preliminary analysis of Solanum tuberosum cv. Asterix commercial cultivar of transiently expressing the same quimeric gene by agro-infiltration method using Agrobacterium 3101 with pk7WG2D-gfp-g2S2-6His-DomB plasmid, compared to another group where exist co-infiltration with Agrabacterium EHA101 containing TCV-CP, that works like a suppressor of silencing of post- transcriptional gene, showed promising results. After the fifth day of agro-infiltration, 5 - 8weeks S. tuberosum leaves were, tested with phytopathogenic bacterium and observed for seven days. By the end of this period, a hypersensitivity reaction was observed at application site which did not expanded for the whole leaf tissue. The dot-blot immunoassay suggest that the expression of p2S26His-DomB polypeptide, in infiltrated leaf wih plasmid and TCV-CP. To get resistant cultivars against P. atrosepticum infection, this work can add information about defensive mechanism of transgenic plants with g2S2-6His-DomB gene and get a better production of transgenic potato plants resistant to phytopathogenic with DomB synthetic gene. pt_BR
dc.description.resumo O gene sintético DomB, isolado da fração da apirase de batata (Solanum tuberosum), apresenta atividade antigênica em animais e confere resistência a plantas de fumo (Nicotiana benthamiana) à infecção bacteriana por Pectobacterium atrosepticum. No presente trabalho, propusemos a análise proteica diferencial em plantas de Nicotiana benthamiana geneticamente modificadas com o gene sintético g2S2-6His-DomB por nanoUPLC-MSE. Para esse fim, comparamos o conteúdo proteico da progênie hemizigótica R0 de N. benthamiana modificadas geneticamente com o gene ao conteúdo proteico de N. benthamiana selvagem, e desses grupos desafiados com P. atrosepticum. Além disso, propusemos a avaliação da atividade do mesmo gene em S. tuberosum via agroinfiltração. A partir da análise das proteínas tripsinizadas, os resultados sugerem que ocorre a produção de proteínas possivelmente ligadas à sinalização de defesa quando as plantas são submetidas à um desafio com uma fitobactéria, porém devido ao baixo número de identificações, temos como perspectiva repetir os experimentos com um maior número de réplicas. As análises preliminares com a cultivar comercial Solanum tuberosum cv. Asterix da expressão transiente do mesmo gene sintético pelo método de infiltração via Agrobacterium cepa 3101 contendo o plasmídeo pk7WG2D-gfp-g2S2-6His-DomB, comparada a outro grupo onde houve a co-infiltração com Agrobacterium EHA101 contendo TCV-CP, que funciona como um supressor do silenciamento de genes pós-transcricionais, apresentou resultado promissor. Após o quinto dia de agroinfiltração, as folhas de S. tuberosum com 5 - 8 semanas foram desafiadas com a bactéria fitopatogênica e observadas por mais sete dias. Ao final desse período observamos que houve uma reação de hipersensibilidade no local de aplicação, mas que tal processo não se expandiu por todo o tecido foliar. O imunoensaio dot-blot sugere a expressão do polipeptídeo p2S26His-DomB nas folhas infiltradas com o plasmídeo e com o TCV-CP. Buscando obter cultivares resistentes a um problema nas culturas de batata, que é a infecção por P. atrosepticum, o projeto pode potencialmente adicionar informações sobre os mecanismos de defesa das plantas modificadas geneticamente com o gene g2S2-6His-DomB e propiciar uma melhor ação na produção de plantas transgênicas resistentes a fitopatógenos com o gene sintético DomB. pt_BR
dc.language por pt_BR
dc.publisher Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) pt_BR
dc.publisher.country Brasil pt_BR
dc.publisher.department ICB – Instituto de Ciências Biológicas pt_BR
dc.publisher.program Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia pt_BR
dc.publisher.initials UFJF pt_BR
dc.rights Acesso Embargado pt_BR
dc.rights Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil *
dc.rights.uri http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ *
dc.subject Domínio B pt_BR
dc.subject Nicotiana benthamiana pt_BR
dc.subject Proteômica pt_BR
dc.subject Pectobacterium atrosepticum pt_BR
dc.subject Solanum tuberosum pt_BR
dc.subject B domain pt_BR
dc.subject Nicotiana benthamiana pt_BR
dc.subject Proteomic pt_BR
dc.subject Pectobacterium atrosepticum pt_BR
dc.subject Solanum tuberosum pt_BR
dc.subject.cnpq CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA pt_BR
dc.title Proteômica diferencial em plantas transgênicas de Nicotiana benthamiana e testes da resistência em Solanum tuberosum induzida pelo mesmo gene contra Pectobacterium atrosepticum pt_BR
dc.type Dissertação pt_BR


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