Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/8296
Ficheros en este ítem:
Fichero Descripción Tamaño Formato  
paulaaparecidaazevedoalmeida.pdf1.48 MBAdobe PDFVista previa
Visualizar/Abrir
Clase: Dissertação
Título : Desenvolvimento e avaliação de método molecular baseado em PCR multiplex para detecção de genes de resistência a antimicrobianos relevantes para o controle da mastite bovina
Autor(es): Almeida, Paula Aparecida Azevedo
Orientador: Ribeiro, João Batista
Co-orientador: Silva, Márcio Roberto
Miembros Examinadores: Menezes, Liliane Denize Miranda
Miembros Examinadores: Húngaro, Humberto Moreira
Miembros Examinadores: Carvalho, Wanessa Araújo
Resumo: A mastite bovina é uma doença caracterizada pela inflamação da glândula mamária e é considerada a principal enfermidade de rebanhos leiteiros no mundo, sendo a que causa os maiores prejuízos econômicos ao setor lácteo. Embora inevitável, o uso de antibióticos para o controle dessa doença pode levar à emergência de linhagens resistentes e deixar resíduos no leite, sendo necessário então, que estes medicamentos sejam usados de forma racional. Com a finalidade de se desenvolver ensaios aprimorados, rápidos e específicos para estudos epidemiológicos, bem como para o diagnóstico da mastite bovina, métodos moleculares têm sido crescentemente estudados objetivando diminuir o tempo necessário para emissão de resultados. Considerando a escassez de dados sobre resistência a antibióticos em patógenos da mastite no Brasil e que resistência a antibióticos é um fenômeno genético, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar um método baseado em PCR multiplex para detectar os principais genes envolvidos na resistência dos patógenos Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae aos principais antibióticos comercializados no Brasil para o tratamento de mastite bovina: tetraciclina (genes tetO, tetK, tetM), eritromicina (gene ermB), gentamicina (gene aacA-aphD) e penicilina (gene blaZ). Um método baseado em PCR multiplex foi desenvolvido para amplificação de todos os marcadores supramencionados e também do gene mecA, que codifica resistência à meticilina/oxacilina e é marcador de multirresistência a antibióticos. Em avaliações preliminares do limite de detecção do ensaio foi demonstrada a necessidade de pelo menos 0,4 ng/μL de DNA bacteriano na reação para que todos os marcadores sejam amplificados simultaneamente. As forças de coincidência (índice Kappa) dos resultados de amplificação utilizando os conjuntos de oligonucleotídeos propostos no presente trabalho, por PCR monoplex e multiplex, dos genes tetO, ermB, mecA, blaZ, tetK e tetM variaram de 84% a 100%, enquanto que dados referentes ao gene aacA-aphD demonstraram uma força de coincidência leve (11%). O método desenvolvido no presente trabalho poderá ser usado para detectar marcadores moleculares de resistência a antibióticos relevantes para estudos epidemiológicos e para controle da mastite bovina no Brasil. Estudos adicionais serão realizados visando à melhoria, adaptação e validação do ensaio para a detecção destes marcadores em amostras de leite bovino.
Resumen : Bovine mastitis is a disease characterized by the inflammation of the mammary gland and is considered the main disease of dairy herds in the world, causing the greatest economic damage to the dairy sector. Although unavoidable, the use of antibiotics for the control of this disease can lead to the emergence of resistant strains and leave residues in the milk, so these drugs must be used rationally. In order to develop improved, rapid and specific studies for epidemiological studies, as well as for the diagnosis of bovine mastitis, molecular methods have been increasingly studied in order to reduce the time required for the emission of results. Considering the scarcity of data on antibiotic resistance in mastitis pathogens in Brazil and that antibiotic resistance is a genetic phenomenon, the objective of the present work was to develop and validate a multiplex PCR-based method to detect the main genes involved in resistance of pathogens Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae to the main antibiotics marketed in Brazil for the treatment of bovine mastitis: tetracycline (tetO, tetK, tetM genes), erythromycin (ermB gene), gentamicin (aacA-aphD gene) and penicillin (blaZ gene). A multiplex PCR-based method was developed for amplification of all of the above-mentioned markers as well as the mecA gene, which encodes methicillin/oxacillin resistance and is a marker of multidrug resistance to antibiotics. Preliminary assessments of the detection limit of the assay have demonstrated the need for at least 0,4 ng/μl of bacterial DNA in the reaction so that all markers are amplified simultaneously. The coincidence forces (Kappa index) of the amplification results using the oligonucleotide sets proposed in the present work, by monoplex and multiplex PCR, of the tetO, ermB, mecA, blaZ, tetK and tetM genes ranged from 84% to 100%, while that data relating to the aacA-aphD gene demonstrated a light coincidence force (11%). The method developed in the present work could be used to detect molecular markers of resistance to antibiotics relevant for epidemiological studies and for the control of bovine mastitis in Brazil. Further studies will be carried out aiming at the improvement, adaptation and validation of the assay for the detection of these markers in bovine milk samples.
Palabras clave : Resistência a antibióticos
Mastite bovina
PCR multiplex
Streptococcus
Staphylococcus
Genes de resistência
Resistance to antibiotics
Bovine mastitis
PCR multiplex
Streptococcus
Staphylococcus
resistance genes
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA
Idioma: por
País: Brasil
Editorial : Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Sigla de la Instituición: UFJF
Departamento: Faculdade de Farmácia
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciência e Tecnologia do Leite e Derivados
Clase de Acesso: Acesso Aberto
URI : https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/8296
Fecha de publicación : 30-ago-2018
Aparece en las colecciones: Mestrado Profissional em Ciência e Tecnologia do Leite e Derivados (Dissertações)



Los ítems de DSpace están protegidos por licencias Creative Commons, con todos los derechos reservados, a menos que se indique lo contrario.