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Tipo: Dissertação
Título: Avaliação de novos análogos da talidomida quanto à inibição da produção de óxido nítrico, citocinas pró-inflamatórias e expressão de CD80 e CD 86 em macrófagos
Autor(es): Mazzoccoli, Luciano
Primeiro Orientador: Teixeira, Henrique Couto
Membro da banca: Sarno, Euzenir Nunes
Membro da banca: Lima, Lidia Moreira
Resumo: A talidomida é utilizada no tratamento de diversas doenças incluindo o eritema nodoso leproso (ENL), uma complicação inflamatória da Hanseníase. Contudo, apresenta atividade teratogênica severa e novos análogos podem ser usados no tratamento da doença sem apresentar este efeito colateral. Uma série de compostos diamínicos contendo duas subunidades ftalimídicas abertas foram escolhidos como análogos da talidomida. Nossos resultados mostram que compostos contendo dois grupos ftalimídicos podem ser facilmente obtidos em elevada quantidade através da condensação de anidrido ftálico ou anidrido 3-nitroftálico com diferentes diaminas comercialmente disponíveis. O efeito destes compostos na produção de TNF-α, IL-12, IL-10 e NO, e na expressão de CD80 e CD86 em células J774A.1 estimuladas com LPS/IFN-γ foi investigado. O nível de mRNA para TNF-α, IL-12, IL-10 e iNOS em J774A.1 foi analisado por RT-PCR em tempo real. Células do sangue periférico humano (PBMC) foram usadas para avaliar a produção de TNF-α, IL-6, IFN-γ , CXCL9 e CXCL10. A produção de citocinas foi avaliada por ELISA, a produção de NO pelo método de Griess, e a expressão de CD80, CD86, CXCL9 e CXCL10 por citometria de fluxo. As células J774A.1 foram incubadas com diferentes concentrações dos compostos (entre 1 a 880 μM) e após 1h foram estimuladas com LPS (1 μg/ml) e IFN-γ (0,4 ng/ml) por 18h. PBMC humano foi incubado de forma similar e estimulado com LPS (2 μg/ml). Três compostos inibiram de forma elevada a produção de TNF-α , IL-12 e NO, conquanto que aumentaram a produção de IL-10. Além disto, inibiram a expressão de CD80, mas não de CD86. Os resultados analisados por RT-PCR em tempo real indicaram que esses compostos atuaram em eventos pós-transcricionais. Os compostos N, N'-Di-(2-carboxi-benzoil)-1,3-propanodiamina, N, N'-Di-(2-carboxi-3-nitro-benzoil)-1,2-etilenodiamina e N, N'-Di-(2-carboxi-3-nitro-benzoil)-1,6-hexanodiamina inibiram mais a produção de TNF-α do que a talidomida (IC50 de 55 μM, 5 μM, 6,1 μM e 220 μM, respectivamente) e também tiveram efeito inibitório na produção de IFN-γ, IL-6, CXCL9 e CXCL10. Os compostos não tiveram efeito na viabilidade celular avaliada por azul de Trypan e por MTT. Este trabalho mostra a síntese e caracterização de novos análogos da talidomida, obtidos em bom rendimento utilizando metodologia simples. Nossos resultados sugerem que a potencial atividade anti-inflamatória e imunorregulatória destes compostos diamínicos apresentam potencial aplicação no tratamento de ENL e outras doenças.
Abstract: Thalidomide is used to treat various diseases including erythema nodosum leprosum (ENL), an inflammatory complication of leprosy. However, it has severe teratogenic activity and novel thalidomide analogues might be used to treat the disease without this severe side effect. A series of diamine compounds containing two hydrolyzed phthalimido structures were chosen as analogues of thalidomide. Our results show that compounds bearing two phthalimido units could easily be obtained in high yield by condensation of phthalic or 3-nitrophthalic anhydride with the different diamines comercially available. The effects of these compounds on production of TNF-γ, IL-12, IL-10 and NO, and on expression of CD80 and CD86 in LPS/IFN-γ stimulated J774A.1 cells were investigated. The level of TNF-, IL-12, IL-10 and iNOS mRNA in J774A.1 was analyzed by real time RT-PCR. Human peripheral blood (PBMC) was used to evaluate TNF-γ, IFN-α, CXCL9 and CXCL10 production. Cytokine production was evaluated by ELISA, NO production by the Griess assay, and CD80, CD86, CXCL9 and CXCL10 expression by cytometry. J774A.1 cells were incubated with different concentrations of the compounds (between 1 and 880 μM) and after 1h stimulated with LPS (1 μg/ml) and IFN-γ (0,4 ng/ml) for 18h. Human PBMC were similarly incubated with the compounds and stimulated by LPS (2 μg/ml). Three compounds greatly inhibited TNF-α, IL-12 and NO production while enhancing IL-10. In addition, CD80 expression was inhibited, but not CD86. The result analyzed by real time RT-PCR indicates that these compounds act in the blocking of post-transcriptional events. The compounds N, N'-Di-(2-carboxy-benzoyl)-1,3-propanediamine, N, N'-Di-(2-carboxy-3-nitro-benzoyl)-1,2-ethylenediamine e N, N'-Di-(2-carboxy-3-nitro-benzoyl)-1,6-hexanediamine inhibited TNF-α production by PBMC greater then thalidomide (IC50 de 55 μM, 5 μM, 6.1 μM and 220 μM, respectively) and also had a inhibitory effect on IFN-γ , IL-6, CXCL9 and CXCL10 production. The compounds had no effect on cell viability, evaluated by Trypan blue exclusion and MTT assay. This work describes the synthesis and characterization novel thalidomide analogues, prepared in good yields using simple methodology. Our results suggest that the potential anti-inflammatory and immunomodulatory activity of these diamine compounds is potentially applicable in treating ENL and other diseases.
Palavras-chave: Análogos da talidomida
Macrófagos
Atividade anti-inflamatória
Citocinas
NO
CD80
Thalidomide analogs
Macrophage
Anti-inflammatory activity
Cytokine
NO
CD80
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Sigla da Instituição: UFJF
Departamento: ICB – Instituto de Ciências Biológicas
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/4270
Data do documento: 29-Abr-2009
Aparece nas coleções:Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações)



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