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https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/4266Arquivos associados a este item:
| Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| andreluizdacunha.pdf | 5.86 MB | Adobe PDF |  Visualizar/Abrir |
| Tipo: | Dissertação |
| Título: | Aplicação de FACE (fluorophore assisted carbohydrate electrophoresis) na análise de condroitim sulfato de uso |
| Autor(es): | Cunha, André Luiz da |
| Primeiro Orientador: | Fontes, Elita Scio |
| Co-orientador: | Aguiar, Jair Adriano Kopke de |
| Co-orientador: | Michelacci, Yara Maria |
| Membro da banca: | Tersariol, Irvane Luis dos Santos |
| Membro da banca: | Medeiros, Valquíria Pereira de |
| Resumo: | Condroitim sulfato é um glicosaminoglicano sulfatado composto por unidades dissacarídicas formadas por ácido D-glucurônico e N-acetil-galactosamina. Este polissacarídeo é utilizado no Brasil em combinação com outros fármacos para tratamento de osteoartrite. Este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade do insumo farmacêutico condroitim sulfato de sódio utilizado em farmácias de manipulação. Para isso foi necessário estabelecer uma técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida para análise de açúcares (FACE), bem como produzir enzimas específicas para a digestão de condroitim sulfato. Diferentes dissacarídeos insaturados, monossacarídeos sulfatados e açúcares neutros derivatizados com 2-aminoacridona foram separados por FACE, usando dois sistemas tampão distintos. Fracionamos por cromatografia de interação hidrofóbica três condroitinases de F. heparinum – condroitinase AC, C e B. Por FACE caracterizamos a atividade dessas enzimas e identificamos contaminação de condroitinase AC por sulfatase específica para hexosamina sulfatada na posição 4, que foi inibida por fluoreto de sódio (10 mM). Glucuronidase com atividade específica para dissacarídeo não sulfatado e 6-sulfatado foi detectada em condroitinase C, e sacarolactona (10 mM) foi capaz de impedir somente a degradação de ΔDi0S. Dosagem de condroitim sulfato em amostras farmacêuticas foi realizada por eletroforese em gel de agarose e por titulação fotométrica. Teor superior a 80% foi encontrado em apenas cinco matériasprimas. O peso molecular médio do condroitim sulfato nessas amostras variou entre 16 e 26 kDa, e análise dissacarídica por FACE revelou proporções próximas entre dissacarídeo 4-sulfatado e 6-sulfatado. Onze amostras apresentaram teor inferior a 20%, e análise por FACE demonstrou presença de contaminação por lactose ou polímeros de glicose com diferentes pesos moleculares. Concluímos neste estudo que há grande distorção entre os resultados reportados no certificado de análise de onze insumos analisados e os resultados obtidos nesse trabalho. Torna-se necessário, portanto, maior fiscalização e regulação do comércio deste produto. |
| Abstract: | Chondroitin sulfate is a sulfated glycosaminoglycan composed of alternate sequences of D-glucuronic acid and N-acetyl-D-galactosamine. This polysaccharide is widely recommended for treatment of osteoarthritis in Brazil, in association with other drugs. The objective of the present study was to evaluate the quality of chondroitim sulfate raw material used for pharmaceutical recipes. A polyacrylamide gel electrophoresis method for carbohydrate analysis (FACE) was established, so as the production of specific enzymes able to digest chondroitin sulfate. Different unsaturated disaccharides, sulfated monosaccharides and neutral sugars derivatized with 2-aminoacridona were resolved by FACE, using two distinct buffer systems. F. heparinum chondroitinase AC, C and B were fractioned by hydrophobic interaction chromatography, and the activity of these enzymes was characterized by FACE. Chondroitinase AC demonstrated contamination by a sulfatase specific for sulfation at position 4 of hexosamine, which was inhibited by 10 mM sodium fluoride. Glucuronidase contamination with specific activity against non sulfated and 6-sulfated disaccharide was detected in chondroitinase C, and 10 mM D-saccharic acid-1,4-lactone inhibited the degradation of only non sulfated disaccharide. Chondroitin sulfate content in pharmaceutical raw materials was determined by agarose gel electrophoresis and by photometric titration. Only five samples showed content greater than 80%. Chondroitin sulfate average molecular weight in these samples varied from 16 to 26 kDa, and disaccharide analysis by FACE revealed similar proportions between 4-sulfated and 6-sulfated disaccharide. Eleven samples showed less than 20% of chondroitin sulfate, and contaminant analysis by FACE detected the presence of lactose or different polymers of glucose. We concluded that there is a large distortion between the data reported at the certificate of analysis of eleven products and the results obtained in this work. Stricter regulation of this raw material should be enforced. |
| Palavras-chave: | Condroitim sulfato FACE Condroitinase Chondroitin sulfate FACE Chondroitinase |
| CNPq: | CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA |
| Idioma: | por |
| País: | Brasil |
| Editor: | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) |
| Sigla da Instituição: | UFJF |
| Departamento: | Faculdade de Farmácia |
| Programa: | Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Tipo de Acesso: | Acesso Aberto |
| URI: | https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/4266 |
| Data do documento: | 31-Jul-2012 |
| Aparece nas coleções: | Mestrado em Ciências Farmacêuticas (Dissertações) |
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