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dc.contributor.advisor1Vasconcelos, Eveline Gomes-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790868H1pt_BR
dc.contributor.advisor-co1Pinto, Priscila de Faria-
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4705804P2pt_BR
dc.contributor.referee1Corrêa, José Otávio do Amaral-
dc.contributor.referee1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4761448Z3pt_BR
dc.contributor.referee2Rosa, Florence Mara-
dc.contributor.referee2Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4705047H4pt_BR
dc.creatorMendes, Rita Gabriela Pedrosa Ribeiro-
dc.creator.Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4711211D0pt_BR
dc.date.accessioned2019-09-24T17:37:19Z-
dc.date.available2019-09-20-
dc.date.available2019-09-24T17:37:19Z-
dc.date.issued2010-07-02-
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/10943-
dc.description.abstractThe antigenicity of both soluble S. mansoni ATP diphosphohydrolase and membraneassociated isoforms has been recently described. Cross-immunoreactivity between potato apyrase and IgG antibody from S. mansoni-infected mice or schistosomiasis patients strongly suggested that the epitopes shared between the vegetable and parasite proteins are antigenic. By bioinformatics analysis, a strategic comparative study of the conserved domains shared between the soluble ATP diphosphohydrolase isoform and potato apyrase predicted a homologue antigenic-domain available for antibody and HLA-DR binding. Synthetic peptides belonging to the domain of the parasite (Sm) and vegetable (pot) proteins were then obtained. By ELISA, the serum samples from the schistosomiasis patients (n= 146) showed high seropositivity of IgG1 (58%) and IgG4 (58%) antibody sub-classes for potato apyrase. Seropositive patients (n= 35) were then selected for analyses of antibody reactivity against the synthetic peptides. Significant seropositivity of IgG (potB1LJ, 9%; potB1MP, 54%; potB2LJ, 54%; SmB1LJ, 23%; SmB1MP, 86%; SmB2LJ, 34%), and IgG1 (potB1LJ, 57%; potB1MP, 67%; potB2LJ, 46%; SmB1LJ, 57%; SmB1MP, 10%; SmB2LJ, 31%) or IgG4 (potB1LJ, 71%; potB1MP, 40%; potB2LJ, 71%; SmB1LJ, 54%; SmB1MP, 63%; SmB2LJ, 49%) was observed for the homologue peptides in accordance with the existence of shared antigenic epitopes between the parasite and vegetable proteins, and demonstrating that in schistosomiasis the domain r155-194 from soluble ATP diphosphohydrolase isoform is rich in B-cell epitopes. The reactivity of the IgG1 and IgG4 antibody from the serum samples of patients (n= 26) cured after chemotherapy with praziquantel was analyzed against potB1LJ e potB2LJ, before and six months after treatment. Individual analysis revealed variable IgG1 and IgG4 reactivity against each peptide, suggesting that different antigenic epitopes could be involved in susceptibility or resistance to S. mansoni reinfection. By ELISA, polyclonal antibody to potato apyrase of BALB/c or CBA/J mice reacts with potB1LJ, potB1MP and/or potB2LJ. Similar reactivity was also observed between these immune sera and SmB1LJ, SmB1MP and/or SmB2LJ, confirming again the cross-immunoreactivity between parasite and vegetable proteins. In addition, inoculation of each peptide in healthy Swiss mice had significant immunostimulatory activity, increasing the amount of total IgG and/or IgG1 and IgG2a antibody, as observed by ELISA and/or Dot blots, suggesting that each peptide has two distinct epitopes capable of inducing a Th1 or Th2-type immune response. By Western blots, serum immune anti-SmB2LJ recognized two polypeptides of approximately 63 and 55 kDa in SEA or SWAP, indicating the presence of the soluble isoform of ATP diphosphohydrolase in these antigenic preparations, as well as the sensitivity and specificity of this immune serum. The potato apyrase and potB1LJ were evaluated in delayed-type hypersensitivity reaction (DTH), using ovalbumin (OVA) as standard antigen, by footpad thickness measurement, titration of antibody sub-class by ELISA, and histological analysis. Seemingly, the inflammatory reaction was similar between potato apyrase and OVA, while potB1J inhibited the DTH reaction. Further studies of these new biomolecules could contribute to a better understanding of host-parasite interactions, and may to be explored as new tools in schistosomiasis research.pt_BR
dc.description.resumoA antigenicidade das isoformas de ATP difosfohidrolase, a solúvel e a associada à membrana, foi recentemente descrita. Imunoreatividade cruzada entre a apirase de batata e anticorpos IgG de camundongos infectados com S. mansoni ou pacientes com esquistossomose sugeriu fortemente que os epitopos compartilhados entre as proteínas do vegetal e parasito são antigênicos. Por análises de bioinformática, um estudo comparativo e estratégico dos domínios compartilhados entre a isoforma solúvel de ATP difosfohidrolase e a apirase de batata permitiu a predição de um domínio homólogo e antigênico disponível para a ligação de anticorpos e moléculas HLA-DR. Peptídeos sintéticos derivados do domínio das proteínas do parasito (Sm) e da batata (pot) foram então obtidos. Usando ELISA, amostras de soro de pacientes com esquistossomose (n= 146) mostraram alta soropositividade de anticorpos das subclasses IgG1 (58%) e IgG4 (58%) para apirase de batata. Pacientes soropositivos (n= 35) foram então selecionados para a análise da reatividade de anticorpos contra os peptídeos sintéticos. Soropositividade significativa de IgG (potB1LJ, 9%; potB1MP, 54%; potB2LJ, 54%; SmB1LJ, 23%; SmB1MP, 86%; SmB2LJ, 34%), e de IgG1 (potB1LJ, 57%; potB1MP, 67%; potB2LJ, 46%; SmB1LJ, 57%; SmB1MP, 10%; SmB2LJ, 31%) ou IgG4 (potB1LJ, 71%; potB1MP, 40%; potB2LJ, 71%; SmB1LJ, 54%; SmB1MP, 63%; SmB2LJ, 49%) foi observada para os peptídeos homólogos confirmando a existência de epitopos antigênicos compartilhados entre as proteínas do parasito e vegetal, e demonstrando que na esquistossomose o domínio r155-194 da isoforma solúvel de ATP difosfohidrolase é rica em epitopos para células B. A reatividade de anticorpos IgG1 e IgG4 de amostras de soros de pacientes (n= 26) curados após a quimioterapia com o praziquantel, foi analisada com potB1LJ e potB2LJ, antes e 6 meses após o tratamento. Análise individual revelou reatividade variável de IgG1 e IgG4 com cada peptídeo, sugerindo que diferentes epitopos antigênicos poderiam estar envolvidos na susceptibilidade ou resistência à reinfecção por S. mansoni. Usando ELISA, anticorpos policlonais contra apirase de batata de camundongos BALB/c ou CBA/J reagem com potB1LJ, potB1MP e/ou potB2LJ. Reatividade similar foi também observada entre estes soros imune e SmB1LJ, SmB1MP e/ou SmB2LJ, confirmando novamente a imunoreatividade cruzada entre as proteínas do parasito e vegetal. Adicionalmente, o inóculo de cada peptídeo em camundongos Swiss saudáveis teve significativa atividade imunoestimulatória, elevando a quantidade de anticorpos IgG e/ou IgG1 e IgG2, como observado por ELISA e/ou “Dot blots”, sugerindo que cada peptídeo tem dois epitopos distintos capazes de induzir resposta imune do tipo Th1 ou Th2. Por “Western blots”, o soro imune anti-SmB2LJ reconheceu 2 polipeptídeos de aproximadamente 63 e 55 kDa em SEA e SWAP, indicando a presença da isoforma solúvel de ATP difosfohidrolase nestas preparações antigênicas, bem como a sensibilidade e especificidade deste soro imune. A apirase de batata e o potB1LJ foram avaliados em reação de hipersensibilidade tardia (DTH) usando a ovalbumina (OVA) como antígeno padrão, por medidas de edema de pata, titulação de subclasses de anticorpos por ELISA, e análise histológica. Aparentemente, a reação inflamatória foi similar entre a apirase de batata e a OVA, enquanto potB1LJ inibiu a reação de DTH. Estudos futuros destas novas biomoléculas poderão contribuir para um melhor entendimento da interação parasito e hospedeiro, e poderão ser exploradas como novas ferramentas de estudo da esquistossomose.pt_BR
dc.description.sponsorshipCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorpt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)pt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentICB – Instituto de Ciências Biológicaspt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologiapt_BR
dc.publisher.initialsUFJFpt_BR
dc.rightsAcesso Embargado*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/*
dc.subjectSchistosoma mansonipt_BR
dc.subjectPacientept_BR
dc.subjectEsquistossomosept_BR
dc.subjectATP difosfohidrolasept_BR
dc.subjectApirase de batatapt_BR
dc.subjectPeptídeospt_BR
dc.subjectAnticorpospt_BR
dc.subjectHumanopt_BR
dc.subjectCamundongopt_BR
dc.subjectPraziquantelpt_BR
dc.subjectDTHpt_BR
dc.subjectSchistosoma mansonipt_BR
dc.subjectPatientpt_BR
dc.subjectSchistosomiasispt_BR
dc.subjectATP diphosphohydrolasept_BR
dc.subjectPotato apyrasept_BR
dc.subjectPeptidespt_BR
dc.subjectAntibodypt_BR
dc.subjectHumanpt_BR
dc.subjectMousept_BR
dc.subjectChemotherapypt_BR
dc.subjectPraziquantelpt_BR
dc.subjectDTHpt_BR
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIApt_BR
dc.titleIdentificação de alvos antigênicos na ATP difosfohidrolase solúvel de Schistosoma mansoni e possível aplicação funcional de peptídeos sintéticospt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
Appears in Collections:Mestrado em Ciências Biológicas - Imunologia e Doenças Infecto - Parasitárias/Genética e Biotecnologia (Dissertações)



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